従来の病理学的手法で検索不能であった微小リンパ節転移に関する食道癌での検討

1995 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 07671355
• Research Category: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• Research Institution: Tohoku University
• Principal Investigator: 片山 正文 東北大学, 医学部・付属病院, 助手 (00177411)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 標葉 隆三郎 東北大学, 医学部, 講師 (20192106) ; 赤石 隆 東北大学, 医学部・付属病院, 講師 (60191847) ; 高野 亮 東北大学, 医学部・付属病院, 助手 (30271935) ; 西平 哲郎 東北大学, 医学部, 助教授 (50101142)
• Keywords: 食道癌 / 微小リンパ節転移 / p53 / p16 / RCR-SSCP / MASA法

Research Abstract

本研究では、食道癌の臨床例で、原発巣とリンパ節からDNAを精製し、まず原発巣に関して癌抑制遺伝子p53およびp16の遺伝子異常を解析し、ついでmutant allele-specific amplication (MASA)法によってリンパ節での微量な遺伝子異常を解析することにより、微小リンパ節転移を検出することを目的とする。現在まで食道手術例32例に関して、主病巣およびリンパ節からのDNAの抽出をおこなった。リンパ節に関してはこのうち4例のみでしか採取できなかった。
まず主病巣に関して、p53の遺伝子異常を検討した。p53のエクソン5、6、7、8に関してPCR-SSCP法で検討し、現在まで8例で異常が認められた。これらの症例で、PCR産物のdirect sequencingを試みたが、きれいにバンドを出すことが困難であった。そのためPCR産物をゲルから切り出し、ベクターに組み込んでサブクローニングを行い、塩基配列を決定した。現在2例に関して、p53の遺伝子異常を確認したところである。1例目では1個所、2例目では2個所の遺伝子変異が確認された。p16に関してはエクソン2の異常を検討すべく、種々のプライマーを設計し、PCRの条件を検討するのを開始したところである。
MASA法による検討に関しては、ようやく原発巣での異常が確認できたので、これから着手することになるという段階である。まずp53の突然変異の部分の塩基配列を3'の末端に置くようにしてプライマーを作製し、PCRの条件の検討をはじめたところである。
今後はp53の検討を全ての症例に関して行い、MASA法による微小リンパ節転移に関する検討を進めていく予定である。またp16に関しても検討を行い、食道癌における微小リンパ節転移の有無、臨床的意義について研究を進めたいと思っている。