1995 Fiscal Year Annual Research Report
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07671700
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Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
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| Research Institution | Research Institute, Osaka Medical Center for Maternal and Child Health |
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Principal Investigator |
本家 孝一 大阪府立母子保健総合医療センター研究所, 代謝部門, 研究員 (80190263)
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| Keywords | 腎細胞癌 / チロシンキナーゼ / EGF / チロシンキナーゼ阻害剤 / Ras |
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| Research Abstract |
ヒト腎癌細胞SMKT-R3は無血清培地でも増殖することから自律増殖能があると考えられる。SMKT-R3細胞にEGFや胎児血清を添加すると、増殖能は少し促進する。そこで、増殖とヒト腎癌細胞で特異的に高発現している糖脂質硫酸転移酵素(GST)の発現にEGF受容体のチロシンキナーゼ活性が関与しているか否かを調べた。チロシンキナーゼ阻害剤GenisteinはEGFによる促進作用を打ち消すのみならず、EGF未処理細胞の増殖を完全に阻害するとともに、GST活性も40〜60%抑制した。このことから、EGF未処理細胞においても内在性のチロシンキナーゼが自律増殖とGST活性の維持に働いていることが推定される。実際、EGF未処理細胞の粗抽出液を電気泳動にかけ、抗ホスホチロシン抗体でウエスタンブロティングを行うと、分子量約12万のバンドが検出され、Genistein存在下では消失した。SMKT-R3細胞ではEGFレセプター以外の内在性のチロシンキナーゼが活性化されており、これが自律増殖とGST発現の両者に働いている可能性が示唆された。SMKT-R3細胞は接着斑キナーゼ(FAK)を発現していたが、分子量12万のチロシンリン酸化蛋白質はFAKではなかった。次に、Rasの関与を解析した。SMKT-R3細胞にv-H-rasを遺伝子導入し安定に発現する細胞株を樹立した。v-H-ras導入細胞は親株と比較して高いGST活性を示したが、増殖能はさほど変化しなかった。v-H-ras導入細胞はRas以下の下流のシグナルが飽和しているため、上流のEGF刺激に対して不応性になっていた。一方、v-H-ras導入細胞にGenisteinを添加してもGSTの活性低下はみられず、GST活性の維持に働くチロシンキナーゼはRasの上流で作用すると思われた。以上の結果より、腎癌細胞でのGSTの発現制御にRasが関与する可能性が示唆された。現在、増殖に及ぼすRasの関与を解析中である。
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Research Products
(1 results)
