真珠腫に特異的に発現する遺伝子の分子生物学的研究 -3′プライム方向cDNAライブラリーのサブトラクション法を用いて-

1995 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 07671854
• Research Category: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• Research Institution: Osaka University
• Principal Investigator: 土井 勝美 大阪大学, 医学部, 講師 (40243224)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 三代 康雄 大阪大学, 医学部, 助手 (00263260) ; 大久保 公策 大阪大学, 医学部, 助教授 (40233069)
• Keywords: 真珠腫 / 3′プライム方向cDNA / IL-6 / HGF / C-MET / MMP-9

Research Abstract

1)真珠腫性中耳炎手術時に摘出した真珠腫マトリックスを液体窒素中にてホモゲナイズした後、グアニジン/酸性フェノール/クロロホルム抽出法にてRNAを抽出し、オリゴdTカラムにてmRNAに精製した。得られたmRNA(遺伝子)とベクタープライマーおよび逆転写酵素を用いてベクタープライマー内に発現遺伝子(DNA)に相補的な遺伝情報を持つ2本鎖cDNAを組み込み、さらに制限酵素であるMboIにより平均270塩基対程度の大きさに切断して3′プライム方向cDNAを作成した。
2)こうして作成した真珠腫cDNAは培養プレート上の大腸菌コロニー内に存在しており、これらの中から偏りなく無作為に約1000個の大腸菌コロニーを選択して、その塩基配列をDNAシークエンス法にて決定する必要がある。時間的制約から、現在のところ約100種類の真珠腫cDNAの遺伝子情報しか得られておらず、今後も上記作業を継続して行う予定である。
3)これまで得られた真珠腫cDNAの遺伝子情報から、真珠腫マトリックスにはIL-6、HGF、C-MET、MMP-9などの発現が増加している可能性が得られた。さらに、これらの物質の局在部位について免疫組織学的および分子生物学的手法により解析中である。