1996 Fiscal Year Annual Research Report
サイクリックAMPによるアミン輸送の抑制と脳内ドーパミン濃度調節のメカニスム
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07672027
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Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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| Research Institution | Meikai University |
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Principal Investigator |
中西 信夫 明海大学, 歯学部, 講師 (20118574)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
栗原 琴二 明海大学, 歯学部, 助手 (10170086)
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| Keywords | vesicular monoamine transport / cyclic AMP / protein kinase / protein phosphatase / dopamine / serotonin / monoaminergic neuron / antidepressant |
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| Research Abstract |
意欲・快感・創造性の亢進など精神活動の基幹に重要な影響を及ぼす中枢モノアミン性神経の活動は細胞外液中のモノアミン濃度に依存する.分泌小胞膜モノアミン輸送は細胞外液アミン濃度調節に決定的に重要である.筆者らは,分泌小胞膜モノアミン輸送を調節するサイクリックAMP(cAMP),および他の因子の作用機構について研究し以下の結果を得た.
1.cAMPによる分泌小胞膜モノアミントランスポーター(VMAT)活性調節におけるリン酸化の関与について:VMATのアミノおよびカルボキシル末端ペプチドを用いて抗VMAT抗体を作製した.PC12細胞を[^<32>P]リン酸でラベルし,VMATリン酸化に対するcAMP/プロテインキナーゼAの影響をこの抗体で検討した.しかし,cAMP処理細胞,対照細胞ともに[^<32>P]ラベルされたVMATを電気泳動後のゲル上に検出できなかった.この結果がVMATがリン酸化されないためか,あるいは抗体の反応性のためかを検討するため,[^<125>I]-azidoiodoketanserineを用いてVMATのphtoaffinity labelingを行い,抗体の性能について検討中である.また同時に,phtoaffinity labelした後,phosphoserine,phosphothreonine抗体を用いてVMATがリン酸化されうるかどうかを検討している.
2.VMAT活性に対するCa^<2+>/プロテインキナーゼC(PKC)の作用について:cAMP/PKA経路とCa^<2+>/PKC経路は信号伝達経路上で密接な相互作用があるので,VMAT抗体作製期間中にCa^<2+>/PKCの経路活性化の影響を検討した.PKC活性化作用をもつフォルボールエステル,PMA,は原形質膜アミン輸送活性,VMAT活性をともに阻害した.PMAによるVMAT活性阻害は,プロテインキナーゼ阻害剤で軽減され,逆にプロテインフォスファターゼ阻害剤で増強された.また,不活性型のPMA立体異性体(4α-PMA)は阻害作用を持たなかったことから,PKC経路もVMAT活性を抑制的に調節すると考えられる(投稿準備中).
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[Publications] Nobuo Nakanishi: "Inhibition of versicular monoamine transport by treatment of PC12 cells with phorbol ester,PMA" Soc.Neurosci.Abst.21. 1382-1382 (1995)
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[Publications] Nobuo Nakanishi: "Regulation of intra and extracellular biopterin levels of PC12 cells in culture by cyclic AMP:stimulation of biosynthesis and inhibition of transport" Pteridines. 7. 35-37 (1996)
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[Publications] Hiroyuki Hasegawa: "Simulation of tryptophan hydroxylase production in a serotonin-producing cell line (RBL2H3) by intracellular calcium mobilizing reagents" FEBS Lett.392. 289-292 (1996)
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[Publications] Nobuo Nakanishi: "Muscarine inhibits cyclic AMP-dependent modulation of monoamine transport in PC12 cells" Soc.Neurosci.Abst.22. 1785-1785 (1996)
