ジゴキシゲニン標識プローブを用いた白血病微小残存病変診断法の確立

1995 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 07672495
• Research Category: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• Research Institution: Kyoto Prefectural University of Medicine
• Principal Investigator: 横田 昇平 京都府立医科大学, 第三内科, 助手 (80231687)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 薗田 精昭 京都府立医科大学, 衛生学, 助教授 (60206688)
• Keywords: 微小残存病変 / T細胞受容体遺伝子 / 免疫グロブリン重鎖遺伝子 / ジゴキシゲニン / 急性リンパ性白血病

Research Abstract

当該年度に、我々は以下の点について解析をすすめた。対象は小児急性リンパ性白血病(ALL)症例である。
1. 既報のT細胞の受容体(T cell receptor,TCR)γ・δ鎖遺伝子再構成に加え、免疫グロブリン重鎖(immuno globukin heavy chain,lgH)再構成を指標とし、微小残存病変(minimal residula disease,MRD)の検索が可能な症例の頻度。
2. ジゴキゲニン標識プローブを用いたTCRγ・δ遺伝子再構成症例の寛解時検体におけるMRD診断。
3. 新たな染色体転座を指標にしたMRD診断の可能性。
解析結果
1. 初診時の白血病細胞DNAをPCR増幅したところ、119例のB-precursor ALLのうちTCRδ、γ鎖、lgH鎖遺伝子再構成の頻度はそれぞれ61%,55%,91%であった。解析した症例全例でいずれかの再構成がみられた。少なくとも2つ以上の再構成を持つ症例の頻度は87%であった。
2. 初診時の白血病細胞DNAをPCR増幅することで得られた遺伝子再構成結合部の増幅産物をジゴキシゲニンでラベルする方法、増幅した結合部の塩基配列を解析し、症例特異的オリゴヌクレオチドを合成しジゴキシゲニンでエンドラベルする方法のいずれかで、MRDを検出する方法を確立した。
3. 最近、12;21転座に伴うTEL/AML1遺伝子再構成が小児precursorB-ALLの約20%で見られることが報告された。われわれもprecursorB-ALLの18%でRT-PCR法によりこの異常を同定し、寛解時の検体を対象として10^<-3>から10^<-4>の感度でMRDの定量が可能であることを示した。

Research Products

• [Publications] 横田昇平、芹生卓、中尾誠: "特集:自家末梢血管細胞移植術I 7.末梢血幹細胞移植と微小残存病変" 日常診療と血液. 5. 47-51 (1995)
• [Publications] Nakao M.Yokota S.Kaneko H.et.al.: "Alterations of CDKN2 ysne Stnuctrne in child hood aaute lmphoblastic leukemia:mutahous of COKN2 are olserued preferonfiag in 7 lineage" Leukemia. (in press).
• [Publications] Seriu T.Yokota S Nakao M et al.: "Prospectve monitorng of minimal residual clisease duning the counse of chemotherapy in patients aunth a alte lymphobiagtic leukemia and degtetion of contamnating thman cells in peripheral llitd stem cells for auto nans plantahry" Leukemia. 9. 615-623 (1995)
• [Publications] Ishikawa K.Seru T Watanabe A et al: "Detection of neoplagtic cells thatypoplas tic and recovey prases preceding acute lynphoblashc leuicemia by in Uino cunsbgiation of rearran 1 celllecertr 8 chai grsx" J.Pediatuc hematology / oncology. 17. 270-275 (1995)
• [Publications] 横田昇平、中尾誠、芹生卓: "末梢血幹細胞移植術 基礎から臨床まで" 南江堂(東京) 編集 原田実根、薗田精昭、高上洋一, 198(5) (1995)