ジゴキシゲニン標識プローブを用いた白血病微小残存病変診断法の確立

1996 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 07672495
• Research Institution: Kyoto Prefectural University of Medicine
• Principal Investigator: 横田 昇平 京都府立医科大学, 医学部, 助手 (80231687)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 薗田 精昭 京都府立医科大学, 医学部, 講師 (60206688)
• Keywords: 微小残存病変 / T細胞受容体遺伝子 / 免疫グロブリン重鎖遺伝子 / ジゴキシゲニン / 急性リンパ性白血病

Research Abstract

平成7年度にはTCRδ・γ鎖遺伝子の再構成を利用して全ALLの80%以上でMRD検索が可能なこと、シゴキシンゲニンを用いた症例特異的プローブのnon-Rl標識が可能であることを示した。
平成8年度も前年度に引き続いてTCRγ・δ鎖遺伝子を利用しジゴキシゲニン標識法で急性白血病における微小残存病変の定量的診断を行った.
本法は感度・再現性ともにが良好であったが,寛解時の検体をPCR増幅したあと,ドットブロット,ハイブリダイゼーション,洗浄,露光,現像を行う必要があり予想外に労力を要することが判明した.そこで放射性同位元素を用いないMRDの診断法として,症例特異的な塩基配列を増幅用プライマーとして利用する検出法をあらたに確立することにした.この方法はまず各医療機関から得られた初診時の白血病細胞のDNAをPCR増幅し,得られたクローン性の産物の塩基配列をdirect sequencing法で決定し,これから症例特異的な増幅用プライマーを設定するものである.このプライマーを各医療機関に送り寛解時の骨髄や末梢血のDNAを増幅し,残存病変の定量を行うことが可能になった.
これらの方法により,今年度は通常化学療法だけでなく,末梢血幹細胞移植治療における,移植片内への白血病細胞混入の程度と予後との相関を調べることとした.23例のALLで移植片内へのMRDの混入と移植後の治療成績について比較検討ができた.この結果,寛解を保っている群(12例)で再発した群(11例)に比べ,有意にPBSC採取までの前治療の期間が長く(129日vs237日、p<0.05), PBSC中に残存細胞が陽性率も有意に低率であった(p<0.05)。これらの事実からこれまで述べてきた通常化学療法だけでなく自家移植においても残存病変測定の有用性が示された.

Research Products

• [Publications] Nakao M, Yokota Sら: "Alterations of CDKN2 gene structure in childhood acute lymphoblastic leukemia : mutations of CDKN2 are observed preferentially in T lineage." Leukemia. 10. 249-254 (1996)
• [Publications] Yasuda H, Nakao M,ら: "T-cell lymphoma presenting with pericardial and pleural effusion as the initial and primary lesion : Cytogenetic and molecular evidence." Internal Medicine. 35 (2). 150-154 (1996)
• [Publications] Nakao M, Yokota Sら: "Detection and quantitation of TEL/AML1 fusion transcripts by polymeraes chain reaction in childhood acute lymphoblastic leukemia." Leukemia. 10. 1463-1470 (1996)
• [Publications] Nakao M, Yokota Sら: "Internal tandem duplication of the flt3 gene found in acute myeloid leukemia." Leukemia. 10. 1811-1818 (1996)
• [Publications] 平田昇平、中尾 誠: "微小残存病変の検出とその意義.カレント内科学No. 7 急性白血病と悪性リンパ腫." 金原出版、東京, 6 (1996)