1995 Fiscal Year Annual Research Report

上皮細胞の糖蛋白質の局在化機構に関する糖鎖の役割

Research Project

Project/Area Number	07680663
Research Category	Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
Research Institution	Sasaki Institute
Principal Investigator	大倉隆司 (財)佐々木研究所, 生化学部, 研究員 (50183223)
Keywords	MDCK細胞 / N-結合糖鎖 / GPI-アンカー / ソーティング / VIP36
Research Abstract	ヒトやラット、マウスなどの腎臓糖蛋白質N-結合型糖鎖の構造はγ-GTPややジペプチジルペプチダーゼ-IVなどを用いて、申請者らのグループが既に明らかにしているが、イヌ腎臓由来のMDCK細胞の糖鎖の研究はほとんど行われていない。そこでどの様な糖鎖の特徴があるか、[^3H]-グルコサミンでメタボリックラベルし、それから可溶化した糖蛋白質をヒドラジン分解・N-アセチル化の後、高圧ろ紙電気泳動、ゲルろ過クロマトグラフィー、各種レクチンクロマトグラフィー、グリコシダーゼ消化などの方法により分析した。その結果、約1/4が高マンノース型糖鎖、残りが2〜4本鎖複合型糖鎖でアセチルラクトサミン繰り返し構造にフコースや2→6結合したシアル酸の結合した構造であることが明らかになった。現在さらにこれらの糖鎖の局在性について検討中である。一方VIP36のうち、レクチン様活性が存在すると思われる疎水性部分約800個のアミノ酸に対するcDNAをMDCK細胞よりRT-PCR法でクローニングした(Vip800)。Vip800のcDNAをpQE-9の発現ベクターに導入し、大腸菌で大量発現を試みたが発現量が低く、Vip800を充分量精製することができなかった。そこでpGEX-2TKベクターにおいてグルタチオンS-トランスフェラーゼ(GST)のcDNA下流につなげ、GSTとの融合タンパク質として大腸菌で発現したところVip800の大量発現に成功した。GSTは抗原として働かないことが明らかにされているため、現在グルタチオンセファロースカラムを用いて精製した融合タンパク質をVip800の抗原としてVip800に対するポリクローナル抗体を作製中である。

Research Products
(5 results)

All Other

All Publications (5 results)

[Publications] 大倉隆司: "Increase of fucosylated serum cholinesterase in relation to high risk groups for hepatocellular carcinoma" Cancer Research. 54. 55-61 (1994)
[Publications] 福島慶子: "Carbohydrate structures of a normal counterpart of the carcinoembryonic antigen produced by colon epithelial cells of normal adults" Glycobiology. 5. 105-115 (1995)
[Publications] 山下克子: "Expression of Siaα2→6Galβ1→4GlcNAc residues on sugar chains of glycoproteins including carcinoembryonic antigens in human colon adenocarcinoma" Cancer Research. 55. 1675-1679 (1995)
[Publications] 山下克子: "先天性N-結合型糖鎖転移不全症候群" 臨床検査. 39. 33-38 (1995)
[Publications] 瀬古玲: "Quantitative differences in GlcNAc : β1→3 and GlcNAc : β1→4 galactosyltransferase activities between in human colonic adenocarcinomas and normal colonic mucosa" Cancer research. (in press).

1995 Fiscal Year Annual Research Report

上皮細胞の糖蛋白質の局在化機構に関する糖鎖の役割

Principal Investigator

大倉 隆司 (財)佐々木研究所, 生化学部, 研究員 (50183223)

Research Products

[Publications] 大倉 隆司: "Increase of fucosylated serum cholinesterase in relation to high risk groups for hepatocellular carcinoma" Cancer Research. 54. 55-61 (1994)

[Publications] 福島 慶子: "Carbohydrate structures of a normal counterpart of the carcinoembryonic antigen produced by colon epithelial cells of normal adults" Glycobiology. 5. 105-115 (1995)

[Publications] 山下 克子: "Expression of Siaα2→6Galβ1→4GlcNAc residues on sugar chains of glycoproteins including carcinoembryonic antigens in human colon adenocarcinoma" Cancer Research. 55. 1675-1679 (1995)

[Publications] 山下 克子: "先天性N-結合型糖鎖転移不全症候群" 臨床検査. 39. 33-38 (1995)

[Publications] 瀬古 玲: "Quantitative differences in GlcNAc : β1→3 and GlcNAc : β1→4 galactosyltransferase activities between in human colonic adenocarcinomas and normal colonic mucosa" Cancer research. (in press).

大倉隆司 (財)佐々木研究所, 生化学部, 研究員 (50183223)

[Publications] 大倉隆司: "Increase of fucosylated serum cholinesterase in relation to high risk groups for hepatocellular carcinoma" Cancer Research. 54. 55-61 (1994)

[Publications] 福島慶子: "Carbohydrate structures of a normal counterpart of the carcinoembryonic antigen produced by colon epithelial cells of normal adults" Glycobiology. 5. 105-115 (1995)

[Publications] 山下克子: "Expression of Siaα2→6Galβ1→4GlcNAc residues on sugar chains of glycoproteins including carcinoembryonic antigens in human colon adenocarcinoma" Cancer Research. 55. 1675-1679 (1995)

[Publications] 山下克子: "先天性N-結合型糖鎖転移不全症候群" 臨床検査. 39. 33-38 (1995)

[Publications] 瀬古玲: "Quantitative differences in GlcNAc : β1→3 and GlcNAc : β1→4 galactosyltransferase activities between in human colonic adenocarcinomas and normal colonic mucosa" Cancer research. (in press).