1995 Fiscal Year Annual Research Report
アクチン結合蛋白質コフィリンと相互作用する因子の出芽酵母を用いた分子遺伝学的解析
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07680786
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Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
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| Research Institution | Tokyo Metropolitan Organization for Medical Research |
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Principal Investigator |
飯田 和子 財団法人東京都臨床医学総合研究所, 細胞生物学研究部門, 研究員 (40151229)
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| Keywords | コフィリン / アクチン結合蛋白質 / 出芽酵母 / 細胞増殖 / 高温感受性変異体 / マルチコピーサプレッサー / WD-40リピート |
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| Research Abstract |
アクチン結合蛋白質コフィリンは、pHに依存してアクチン繊維を切断する、分子量約2万の蛋白質である。我々は、コフィリンの細胞内機能の解明をめざして、分子遺伝学的解析が容易な出芽酵母よりコフィリン遺伝子COF1をクローニングした。COF1は、酵母細胞の増殖に必須な遺伝子であった。そこで、in vitro mutagenesisにより、高温感受性コフィリン遺伝子cof1-1を作成した。染色体上のCOF1をcof1-1で置き換えた変異株の高温での増殖を可能にする活性を指標として、出芽酵母の遺伝子ライブラリーより、cof1-1のマルチコピーサプレッサーSCF1をクローニングした。遺伝子破壊株の四分子解析の結果、SCF1は必須遺伝子ではなかった。データベースを検索した結果、SCF1は、出芽酵母のtwo hybird systemを用いてアクチンと結合する蛋白質としてスクリーニングされたAIP1と同一の遺伝子であった。Scf1/Aip1蛋白質は、615アミノ酸からなり、三量体G蛋白質のベータサブユニットに代表される一群の蛋白質に含まれている、WD-40リピートを7個有している。Scf1/Aip1蛋白質の細胞内機能を明らかにするために、大腸菌で合成したScf1pをウサギに免疫して抗Scf1抗体を得た。予備的な免疫沈降実験の結果では、コフィリンとScf1pとは、直接結合はしていないと思われる。今後、さらに解析を進め、コフィリンとScf1pを含む関連蛋白質の細胞内機能を明らかにしたい。
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Research Products
(1 results)
