1995 Fiscal Year Annual Research Report
in situ RT-PCRによる脳内サイトカインの局在同定と半定量化の試み
| Project/Area Number |
07680835
|
|---|
| Research Category |
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
|
| Research Institution | Tokyo Metropolitan Institute for Neuroscience |
|---|
Principal Investigator |
石原 好弘 (財)東京都神経科学総合研究所, 神経病理研究部門, 副参事研究員 (50079711)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
申 台均 (財)東京都神経科学総合研究所, 神経病理研究部門, 研究員
松本 陽 (財)東京都神経科学総合研究所, 神経病理研究部門, 副参事研究員 (90173921)
|
|---|
| Keywords | 自己免疫性脳脊髄炎 / in situ RT-PCR / サイトカイン |
|---|
| Research Abstract |
自己免疫性脳脊髄炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)を発症した中枢神経系でのミクログリアとアストロサイトの相互作用を知る目的で、in situ RT-PCRによりサイトカインmRNAを組織上で増幅・同定することを試みた。
in situ RT-PCRはproteinase K処理後、SuperScript Preamplification Systemで逆転写した。さらにDIG-dUDP存在下で、TGF-β1異的なプライマーを用いてPCRを行ない、DIG標識PCR産物を抗DIG抗体による免疫染色で同定した。in situ RT-PCRではEAE極期に炎症細胞とミクログリアと考えられる細胞が多数陽性であった。
組織上にある分子を同定する場合、蛋白レベルとmRNAレベルでの解析が望ましい。しかしながら、液性分子の免疫染色は不確実なことが多い。そこで本研究では、組織上のmRNAをin situ hybridization(ISH)とin situ RT-PCRで検索したが、前者はサイトカイン検出には感度不足のことが多く、後者のほうがより有用であると考えられた。ただし、逆転写後にRNase処理するなどして、より特異的な遺伝子増幅を行なう必要があろう。
|
-
[Publications] Hirahara, H. et al.: "Long-term survival of cardiac allografts in rats treated before and after surgery with monoclonal antibody to CD2" Transplantation. 59. 85-90 (1995)
-
[Publications] Ikarashi, Y. et al.: "Recipient-derived T cells participate in autoimmune-like hepatic lesions induced by graft-versus-host reaction." Autoimmunity. 20. 121-127 (1995)
-
[Publications] 田沼直之ら: "Competitive PCRによる自己免疫性脳脊髄炎におけるサイトカインmRNAの解析." 神経免疫学. 3. 48-49 (1995)
-
[Publications] Matsumoto, Y. et al.: "Characterization of CD4-CD8-TCRαβ+T cells appearing in the subarachnoid space of rats with autoimmune encephalomyelitis." Eur. J. Immunol.(in press).
-
[Publications] Shin, T. et al.: "The subarachnoid space as a site for precursor I cell proliferation and effector T cell selection in experimental autoimmune encephalomyelitis." J. Neuroimmunol.56. 171-177 (1995)
-
[Publications] Tanuma, N. et al.: "Pretreatment with T cell receptor peptide using conventional immunization protocol does not induce effective protection against autoimmune encephalomyelitis" Cell. Immunol.(in press).
