1996 Fiscal Year Annual Research Report
腫瘍髄伴症候群の新しい神経特異的抗原蛋白質のcDNAクローニングとその機能
| Project/Area Number |
07680845
|
|---|
| Research Institution | Okayama University |
|---|
Principal Investigator |
筒井 公子 岡山大学, 医学部, 講師 (70144748)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
徳永 叡 岡山大学, 医学部, 教授 (40009634)
|
|---|
| Keywords | 腫瘍髄伴症候群 / 乳癌 / 自己抗体 / 神経特異的抗原 / amphiphysin |
|---|
| Research Abstract |
腫瘍髄伴症候群で亜急性感覚性neuropathyを発症した患者血清中の自己抗体が、130kDaの神経特異的タンパク質を認識することを見いだした。自己の乳癌組織でも同じ分子量のタンパク質を認識したので、このタンパク質は腫瘍髄伴症候群の新しい共通抗原と考えられた。平成7年度の研究結果から、この抗原タンパク質(HT抗原)はシナプスに存在し、シナプス小胞のリサイクルに関与しているamphiphysin(peripheral membrane proteinsの一つ)である可能性が強く示唆された。Amphiphysin のcDNAは最近ニワトリとヒトでクローニングされ、全長の塩基配列が発表されている。今年度はHT抗原がamphiphysinであるかどうかを同定した。
1、ヒトamphiphysinのcDNAフラグメントをin vitroで発現させ、HT抗体が発現タンパク質を認識するか否かをウェスタンブロットで調べたところ、amphiphysinのc-terminalフラグメントを認識した(エール大学のPietro De Camilli等との共同研究。彼らはヒトamphiphysinのcDNAをクローニングした)。
2、HT抗体でラット脳の免疫組織化学的検索を行うと、130kDaのタンパク質は大脳皮質、小脳皮質等、シナプスの豊富な部位に検出され、神経終末に局在していた。免疫電顕法で神経終末を詳細に観察すると、HT抗原はシナプス小胞の周囲に認められた。
3、1、2の結果からHT抗原がamphiphysinであることは確実になったので、ヒトおよびニワトリのamphiphysin cDNAの塩基配列を参考にして、ラット脳幹のcDNAライブラリーからPCRでラットamphiphysinのcDNAをクローニングした。全長はまだカバーしていないが塩基配列を決定したところ、ヒトおよびニワトリと高いホモロジーを示した。
4、ヒトおよびラットの網膜では、130kDa以外に分子量の異なる数種のタンパク質がHT抗体により認識されることをウェスタンブロットで見いだした。Amphiphysinにアイソフォームが存在する可能性が考えられ、現在検索中である。
|
-
[Publications] K.Tsutsui: "Expression of DNA topoisomerase IIβ in differentiating cerebellar cortical neurons" Neurosci.Res.,. Suppl.20. S127- (1996)
-
[Publications] A.Tokunaga: "Expression of DNA topoisomerase IIβ increases in the supna optic neurosecretory neurons after water deprivation" Neurosci.Res.,. Suppl.20. S84- (1996)
-
[Publications] S.Okada: "Subdomain structure of the thmatrix attachment region located within the mouse immunoglobulin ky gene intron" Biochem.Biophys.Res.Com.222. 472-477 (1996)
-
[Publications] A.Tokunaga: "Immunohistochemical characterization of the suprachiasmatic nudeus and the intergeniculate leatlet in the hereditary pilaterally" Neecroscience Res.(in press). (1997)
-
[Publications] H.Tosa: "Inhibitory Activity of Xanthone Derivatives Isolated From Some Guttiferaeous Plauts Agaiust DNA Topoisomerase I and II" Chem.Pharm.Bull.(in press). (1997)
-
[Publications] K.Tsutsui: "Free Radicals in Brain Physiology and Disorders Eds.Packer,C.,Hiramatsu,M.and Yoshikawa,T." Acad.Press, 474 (1996)
