慢性関節リウマチ滑膜に特異的に浸潤したT細胞のクローニングによる解析

1995 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 07770344
• Research Institution: Tokyo Women's Medical University
• Principal Investigator: 谷口 敦夫 東京女子医科大学, 医学部, 助手 (40179833)
• Keywords: 慢性関節リウマチ / T細胞受容体 / クローニング / PCR

Research Abstract

【目的1】同一患者における慢性関節リウマチ(RA)滑膜及び末梢血由来のT細胞クローンの解析については、2例のRA患者の滑膜及び末梢血より単核球を分離し、限界希釈法によりT細胞クローンを作成した。得られたT細胞クローンは患者Aでは滑膜から65個、末梢血から53個、患者Bでは滑膜から81個、末梢血から85個であった。各々のT細胞クローンよりmRNAを抽出し、RT-PCR法より使用しているTCR Vβ geneの決定をすでに終了した。滑膜ではTCR Vβ 14が多く末梢血で少ないとの報告があるが、われわれの検討ではこのような傾向は認めていない。また、患者A、Bの滑膜および末梢血のT細胞クローンで特定のVβの使用頻度が高い傾向は認めなかった。現在、これらのT細胞クローンのCDR3領域のシークエンスを進めている段階である。この操作でRA滑膜と末梢血共通のT細胞クローンを選び出し、これらのクローンの機能をサイトカイン(interleukin-2,interkeukin-4,interferon-γ)を中心に解析する予定である。
【目的2】RA滑膜由来のT細胞クローンのTCR Vα geneの解析については、2例のRA患者の末梢血リンパ球から抗体を用いて特定のTCR Vαを持つT細胞をフローサイトメトリを用いてソーティングし、回収したT細胞のクローニングを行なっている。今後、異なるTCR Vα抗体を用いてこれらの2種のTCR Vαを表現しているT細胞クローンを選択する予定である。