1995 Fiscal Year Annual Research Report

ヒト細胞のDNA代謝に関与するヘリカーゼの探索と構造解析

Research Project

Project/Area Number	07772205
Research Institution	The Institute of Physical and Chemical Research
Principal Investigator	浴俊彦理化学研究所, 細胞生理学研究室, 研究員 (40192512)
Keywords	ヘリカーゼファミリー / DNA代謝 / RNA代謝 / ホモロジーサーチ / 酵母 / cDNA / ホモログ
Research Abstract	(1)系統的なヒトヘリカーゼファミリー遺伝子を単離するために、ヘリカーゼファミリーに共通したモチーフ配列(DEAD等 motif I-VI)に対するPCR primerをデザインして、HeLa細胞より作製されたcDNAライブラリーからPCRによって候補遺伝子断片を増幅・回収することを試みた。単離されたcDNA断片をクローンし、一部につき塩基配列解析を行った。しかし、ライブラリー中のcDNA種の偏りを反映し、elongation factorなどabundantなcDNAクローン断片が数多く得られ、稀少なcDNA種を見出すことは困難であった。 (2)そこでヘリカーゼファミリーの単離について、(1)とは別のアプローチを取ることに決めた。即ち、現在、その全塩基配列が決定されつつある酵母遺伝子からヘリカーゼファミリーに保存されたモチーフを持った遺伝子を同定し、これらの遺伝子の遺伝子破壊、蛋白質発現によるヘリカーゼ活性の検討、および相同性検索によるヒトホモログの同定を通じて、新たなヘリカーゼファミリー遺伝子を単離することを試みている。既に酵母で変異株などとして同定されたものを除く新規遺伝子8個を選び、遺伝子破壊を行った結果、少なくとも5個の増殖に必須なヘリカーゼファミリー遺伝子を見出している。現在、その生理的機能・酵素活性などについて検討している。 (3)生化学的に同定されたヘリカーゼについてそれらの一次構造(モチーフ)情報を得るため、東大・薬学部(榎本助教授)と共同で、マウスDNAヘリカーゼBについてその一次構造解析を行った。しかし、ヒトDNAヘリカーゼBについては複数のcDNAライブラリーやRT-PCRなどによるスクリーニングでは単離することができなかった。

Research Products
(6 results)

All Other

All Publications (6 results)

[Publications] Seki, M. et al.: "Characterization of DNA synthesis and DNA-dependent ATPase activity at the restrictive temperature in temperature-sensitive mutants, tsFT848 cells, with thermolabile DNA helicase B" Mol. Cell. Biol.15. 165-172 (1995)
[Publications] Okumura, K. et al.: "Assignment of the 36.5kDa (RFC5), 37kDa (RFC4), 38kDa (RFC3), and 40kDa (RFC2) subunit genes of the human replication factor C to chromosome bands 12q24.2-q24.3,3q27,13q12.3-q13, and 7q11.23" Genomics. 25. 274-278 (1995)
[Publications] Shiratori, A. et al.: "Assignment of the 49-kDa (PRIM1) and 58-kDa (PRIM2A and PRIM2B) subunit genes of the human DNA primase to chromosome bands 1q44 and 6p11.1-p12" Genomics. 28. 350-353 (1995)
[Publications] Eki, T. et al.: "Efficient replication of polyomavirus DNA in a cell-free system supplemented with Escherichia coli singlestrandedDNA binding protein, which exhibits species-specificity in the requirement for DNA polymerase" J. Biochem. (Tokyo). 118. 435-441 (1995)
[Publications] Murakami, Y. et al.: "Analysis of the nucleotide sequence of chromosome VI from Schacaromyces cerevisiae" Nature Genet.10. 261-268 (1995)
[Publications] Eki, T. et al.: "Analysis of a 36.2kb DNA sequence including the right telomere of chromosome VI from Sacchoromyces cerevisiae" Yeast. 12. 149-167 (1996)

1995 Fiscal Year Annual Research Report

ヒト細胞のDNA代謝に関与するヘリカーゼの探索と構造解析

Principal Investigator

浴 俊彦 理化学研究所, 細胞生理学研究室, 研究員 (40192512)

Research Products

[Publications] Seki, M. et al.: "Characterization of DNA synthesis and DNA-dependent ATPase activity at the restrictive temperature in temperature-sensitive mutants, tsFT848 cells, with thermolabile DNA helicase B" Mol. Cell. Biol.15. 165-172 (1995)

[Publications] Okumura, K. et al.: "Assignment of the 36.5kDa (RFC5), 37kDa (RFC4), 38kDa (RFC3), and 40kDa (RFC2) subunit genes of the human replication factor C to chromosome bands 12q24.2-q24.3,3q27,13q12.3-q13, and 7q11.23" Genomics. 25. 274-278 (1995)

[Publications] Shiratori, A. et al.: "Assignment of the 49-kDa (PRIM1) and 58-kDa (PRIM2A and PRIM2B) subunit genes of the human DNA primase to chromosome bands 1q44 and 6p11.1-p12" Genomics. 28. 350-353 (1995)

[Publications] Eki, T. et al.: "Efficient replication of polyomavirus DNA in a cell-free system supplemented with Escherichia coli singlestrandedDNA binding protein, which exhibits species-specificity in the requirement for DNA polymerase" J. Biochem. (Tokyo). 118. 435-441 (1995)

[Publications] Murakami, Y. et al.: "Analysis of the nucleotide sequence of chromosome VI from Schacaromyces cerevisiae" Nature Genet.10. 261-268 (1995)

[Publications] Eki, T. et al.: "Analysis of a 36.2kb DNA sequence including the right telomere of chromosome VI from Sacchoromyces cerevisiae" Yeast. 12. 149-167 (1996)

浴俊彦理化学研究所, 細胞生理学研究室, 研究員 (40192512)