単クローン抗体による内向き整流性ポタシウムチャネルの組織内分布と細胞内分布の解析

1995 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 07780749
• Research Institution: Tokyo Metropolitan Institute for Neuroscience
• Principal Investigator: 久保 義弘 (財)東京都神経科学総合研究所, 神経生理, 主任研究員 (80211887)
• Keywords: 内向き整流性 / ポタシウム チャネル / 抗体 / 軸索 / 発生 / 脳 / IRK1 / GZRK1

Research Abstract

内向き整泡性ポタシウムチャネルを代表する2つのメンバーである、IRK1,G2RK1チャネルに対する抗体を下記のように作成した。抗原性が高く、相同性の低い部位の合成ペプチドを抗原として用い、ポリクローナル抗体およびポリクローナル抗体の作成のため、ウサギ,マウスにそれぞれくり返し皮下注入した。
titerの高いポリクローナル抗体が得られたので、ペプチド抗原を用いて、アフィニィティ精製した後に、組織化学的解析を行った。機能抗体として用いるために、単クローン抗体の作成も行ったが、現時点では、titerの高いものはまだ得られておらず、ハイプリおよびスクリーニングを継続している。
ポリクローナル抗体による組織化学的解析の結果、IRK2,GIRK2チャネルの脳内分布について以下の知見が得られた。
(1)IRK1,G2RK2ともに小脳,海馬等脳内の広い部域に発現がみられ
(2)snbccllnlarのlevelでは、どちらも細胞体および軸索に発現しており、
(3)発生過程を追った解析では、G2RK2は最終分裂をおえた神経細胞に発現するという点が明らかになった。