慢性関節リウマチのサイトカイン産生にかかわる核内転写因子の解析

1996 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 07807053
• Research Institution: University of Occupational and Environmental Health
• Principal Investigator: 江藤 澄哉 産業医科大学, 医学部, 教授 (90010347)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 太田 俊行 産業医科大学, 医学部, 助教授 (10140930)
• Keywords: 慢性関節リウマチ / 滑膜細胞 / 核内因子 / サイトカイン / インターロイキン-1 / 遺伝子導入 / 遺伝子調節

Research Abstract

1.RA患者滑膜細胞およびRA由来滑膜細胞株E11では、IL-1βをはじめIL-6,TNFなどの炎症性サイトカインの産生を無刺激状態で産生しており、この産生はIL-1α、β、PMAなどの刺激で著明に増強された。刺激後のIL-1mRNAの発現増強は変形関節症由来の滑膜細胞に比して極めて短時間に認められた。
2.RA患者滑膜細胞およびRA由来滑膜細胞株E11細胞上には、ICAM-1分子の強い発現が観察され、これらを抗ICAM-1抗体にてクロスリンクする事によりE11におけるIL-1β産生及びmRNAの発現が増強した。
3.E11において、ICAM-1分子を介する刺激に応答するIL-1β遺伝子調節領域は、転写開始部位より約3000bp上流に存在する約400bpの領域であった。この領域には、2カ所のAP-1結合部位が存在するが、このうち上流域のAP-1結合部位をdeleteするとCAT活性が著減する事より、このAP-1結合部位がIL-1β刺激時のIL-1β転写誘導に重要な働きをしていることが明らかとなった。
4.AP-1、NFkB、CREB、NFIL-6など既にいくつかの炎症性サイトカインの遺伝子発現に重要な核内因子の結合モチーフをタンデムに数個もつCATベクターをトランスフェクションし、ICAM-1クロスリンク刺激時のCAT活性を検討したところ、AP-1結合部位を含むもののみ有意なCAT活性増強が認められた。
5.ICAM-1刺激に応答するIL-1β遺伝子調節領域のDNAをプローベとしてバンドシフトアッセイを行ったところ,刺激によりAP-1蛋白が活性化されプローベに結合することを確認した。
以上より慢性関節リウマチ滑膜細胞においては、サイトカインなどの可溶性分子による刺激に加えて、周囲の細胞との接着を介して炎症性サイトカイン遺伝子の発現調節が行われており、炎症の持続遷延に関与している事が示唆された。

Research Products

• [Publications] Wake,A.: "Calcium-dependent homotypic adhesion through leukocyte function-associated antigen-1/intercellular adhesion molecule-1 induces interleukin-1 and parathyroid hormone-related protein production on adult T-cell leukemia cells in vitro." Blood. 86巻. 2257-2267 (1995)
• [Publications] Tanaka,Y.: "Osteoblasts are regulated by the cellular adhesion through ICAM-1 and VCAM-1." J.Bone Miner.Res.10巻. 1462-1469 (1995)
• [Publications] Tanaka,Y.: "Heparan sulfate proteoglycan on leukemic cells is primarily involved in integrin-triggering and its mediated adhesion to endothelial cells" J.Exp.Med.184巻. 1987-1997 (1996)
• [Publications] Koyama,Y.: "Cross-linking of intercellular adhesion molecule 1 (CD54) induces AP-1 activation and IL-1 β transcription" J.Immunology. 157巻11号. 5097-5103 (1996)
• [Publications] Abe,M.: "Regulation of interleukin (IL)-1 β gene transcription induced by IL-1 β in rheumatoid synovial fibroblast-like cells,E11,transformed with simian virus 40 large T antigen" J.Rheumatology. 24 (in press). (1997)
• [Publications] Nakatsuka,K.: "Rheumatoid Synovial Fibroblasts Are Stimulated by the Cellular Adhesion to T Cells through Lymphocyte Function Associated Antigen-1/Intercellular Adhesion Molecule-1" J.Rheumatology. 24 (in press). (1997)
• [Publications] Tanaka,Y.: "An Approach to diseases-Immunology,Hematology,Cancer" Adhesion molecules in inflammation., 8 (1996)