1996 Fiscal Year Annual Research Report
子宮内膜症特異遺伝子群のcDNAクローニングとその臨床応用
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07807156
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| Research Institution | OSAKA CITY UNIVERSITY |
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Principal Investigator |
荻田 幸雄 大阪市立大学, 医学部, 教授 (00047086)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
梅咲 直彦 大阪市立大学, 医学部, 助教授 (20106339)
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| Keywords | 子宮内膜症 / cDNAクローニング / 子宮内膜 / differential display |
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| Research Abstract |
本研究の目的は正所性子宮内膜組織mRNAを用いたdifferential display法(Science 257 : 967, 1992)で、子宮内膜症特異遺伝子cDNA断片をクローニングすることであった。この研究を計画した背景にはふたつの大前提が必要である。すなわち、1)子宮内膜症患者と正常婦人の正所性子宮内膜組織には明らかにその発現遺伝子群に差が存在しているということ、2)differential display法による遺伝子クローニング法の再現性が高いこと、の2点である。今回の研究では、研究の途中でこのふたつの大前提に研究前には予想していなかった問題点が見い出され、研究方向の転換を余儀なくされた。その問題点とは、1)については、子宮内膜症患者と正常婦人の正所性子宮内膜組織には確かに細胞生物学的な差が見い出されたが(Tanaka, Umesaki, Ogita et al.投稿中;田中、梅咲、荻田ら:エンドメトリオージス研究会誌1997)、安定した遺伝子発現の異常とは捕えられなかった。これは、一見健常とみられる女性にも少なからず子宮内膜症の小病変が認められること、子宮内膜症の重症度により二次的な刺激効果が加わっているため遺伝子発現にも安定した変異がdifferential display法では検出困難であったことなどに原因している。2)については、当初我々は参考論文にしたがってrandom 12merをPCR primerとして応用していたが、途中経過報告書にも述べたように微量の混入cDNA断片が増幅されたり、再現性の少ないcDNA断片がスクリーニングされてくることが予想外に多かった。このdifferential display法が報告された当時は画期的な遺伝子クローニング法として各研究方面に試みられ、我々も採用した。しかし、実際にこの方法で遺伝子クローニングに成功したという報告は殆どない。differential display法は最近多くの研究室で応用されており、様々な問題点とそれに対する改良法も発表されており、我々もこの改良法に準じて変更を行ったが不成功に終わった。
今回の研究を進めて行くうちに、differential display法によるcDNAクローニングにいくつかの難題が見いだされたため、子宮内膜症に特有の遺伝子変異を明確にするために細胞生物学的な解析も行った。2方向からその解析を行い、1)子宮内膜症患者血清中に検出される抗子宮内膜抗体の特異性と生物活性(Mizuno, Umesaki, Ogita et al.JSRI in press, 1997 ; Tanaka, Umesaki, Ogita et al.投稿準備中)、2)子宮内膜症患者と正常婦人から樹立した長期培養正所性子宮内膜組織の細胞学的性状(田中、梅咲、荻田ら,エンドメトリオージス研究会誌,1997 ; Mizuno, Umesaki, Ogita et al.投稿準備中)、について内膜症特異遺伝子クローニングのための別の足掛りを得た。これらに関しては、現在も解析中にある。
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[Publications] Tanaka T.et al.: "Cytokine regulation of Fas-mediated apoptotic signals in human endometrial epithelium" proceeding of 9th JSIR. 10. 21-22 (1996)
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[Publications] Mizuno K.et al.: "Characterization of apoptotic signals mediated by TNF-receptor family in human endometrium : Regulation by cytokines" proceeding of 9th JSIR. 10. 79-80 (1996)
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[Publications] Tanaka T.et al.: "Establishment and characterization of B1-derived macrophage cell line : Effects of anti-endometriotic medicine, Danazol, on the macrophage cells and the parent B1 cells" proceeding of 11th JSIR. (in press). (1997)
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[Publications] Chang L.et al.: "Regulating system in susceptibility to apoptosis in human endometrial epithelium : Regulation by specific binding of endometrial cells to extracellular matrices" proceeding of 11th JSIR. (in press). (1997)
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[Publications] Nagashima T.et al.: "Fas-mediated apoptosis in human endometrial epithelium and intrauterine cytokine network" proceeding of 11th JSIR. (in press). (1997)
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[Publications] Mizuno K.et al.: "Flowcytometric characterization of anti-endometrial antibodies in endometriotic patient sera" proceeding of 11th JSIR. (in press). (1997)
