1996 Fiscal Year Annual Research Report
ルービン根による酸性フォスファターゼ分泌能の遺伝子解析とリン欠乏耐性植物の育成
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08255202
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| Research Institution | Hokkaido University |
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Principal Investigator |
但野 利秋 北海道大学, 農学部, 教授 (40001440)
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| Keywords | 酸性フォスファターゼ / 分泌 / ル-ピン / P欠乏 / 遺伝子解析 / cDNAライブラリー / mRNA / 塩基配列 |
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| Research Abstract |
前年度の実験において、5.5×10^4pfuのcDNAライブラリーからcDNAの全長を含んでいると予想されるおよそ2,200bpの断片を含む陽性クローンを単離し、LASAP1と命名した。本年度は、このクローンのdeletion seriesを作成し、Sangerのdideoxy chain-terminal法により全塩基配列を決定した。LASAP1は2,187bpからなり、、637アミノ酸残基をコードする1,914bpのopen reading flameを有していた。データベースPDB,SWISS-PROT,PIR,GenPeptに対してアミノ酸配列の相同性検索を行った結果、Phaseolus vulgaris由来のacid phosphatase (APase)に76%、Arabidopsis thaliana由来のAPaseに71%、2つのAspergillus由来のAPaseにそれぞれ59%、58%の高い相同性を有していた。Phaseolus vulgaris由来のAPaseについてはFe,Znを含有する活性中心を7つのアミノ酸が構成することが報告されている(Strater et al., 1995)が、全てのアミノ酸がlupin,Arabidopsisで保存されており、これらの酸素は全て同様の機構で反応することが示唆された。先に、本酵素のN-末端アミノ酸配列を決定したが、LASAP1にはこれより上流に31のアミノ酸からなる領域が存在した。この領域は疎水性の高い領域であり、分泌性であるダイズおよびArabidopsisのAPaseのそれと類似していることを考えると、この領域は分泌に必要なシグナル配列であると考えられる。また、前年度に調製可能となったプローブLAP493を用いゲノムライブラリーをスクリーニングしたところ、1つの陽性クローンが得られた。現在このクローンについて解析中である。
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[Publications] H. Sakai and T. Tadano: "Characteristics of response of acid phosphatase secreted by the roots of several crops to various conditions in the growth media." Soil Sci. Plant Nutr.39. 437-444 (1993)
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[Publications] T. Tadano, K. Ozawa, H. Sakai, M. Osaki, and H. Matsui: "Secretion of acid phosphatase by the roots of crop plants under phosphorus-deficient conditions and some properties of the enzyme secreted by lupin roots." Plant and Soil. 155/156. 95-98 (1993)
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[Publications] K. Ozawa, M. Osaki, H. Matsui, M. Honma, and T. Tadano: "Purification and properties of acid phosphatase secreted from lupin roots under phosphorus-deficiency conditions." Soil Sci. Plant Nutr.41. 461-469 (1995)
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[Publications] Li. M. and T. Tadano: "Comparison of characteristics of acid phosphatases secreted from roots of lupin and tomato." Soil Sci. Plant Nutr. 42. 753-763 (1996)
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[Publications] Li. M. M. Osaki, M. Honma, and T. Tadano: "Purification and caracterization of phytase induced in tomato roots under phosphorus-deficient conditions." Soil Sci. Plant Nutr.43. 179-190 (1997)
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[Publications] Li. M., T. Shinano, and T. Tadano: "Distribution of exudates of lupiin roots in the thizosphere under phosphorus deficient conditions." Soil Sci. Plant Nutr.43. 237-245 (1997)
