1996 Fiscal Year Annual Research Report
新しいゲノム・サブトラクション法を用いたがん抑制遺伝子の探索
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08265217
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| Research Institution | The University of Tokyo |
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Principal Investigator |
木山 亮一 東京大学, 分子細胞生物学研究所, 助手 (00240739)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
大石 道夫 通産省工業技術院/生計工学工業技術研究所, 所長 (00126004)
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| Keywords | ゲノムサブトラクション / LOH / がん抑制遺伝子 / 発がん / 腎がん / マイクロサテライト / 多型 |
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| Research Abstract |
本研究の目的は新しいゲノムサブトラクション法であるIn-gel competitive reassociation(IGCR)法を用いてがん抑制遺伝子の単離・同定を行なうものである。本年度は、計画として当初予定していた様に腎がん組織のDNAを用いてIGCR法によりLOH部位の濃縮を検討した。腎がん患者2例より腎がん組織と正常組織を得、ゲノムDNAを抽出した後、IGCR法を用いてサブトラクションを行なった後、両組織間で異なるDNA断片を含むクローンのライブラリーを構築した。それぞれのライブラリーについてクローンを用いてサザンハイブリダイゼーションを行ったところ、確かに両者で異なるパターンを示すクローンが得られていた。約800個のクローンについてさらに詳しく解析を行なった結果、これらのライブラリーのcomplexityは約3×10^4であり、クローンの35〜77%がLOHを示した。また、LOHは反復配列を含むクローンでも見られ、本方法が反復配列を含む多くのDNA断片に適用可能であることが改めて確認された。また、正常組織由来のDNAの混入率をマイクロサテライトDNAの多型を利用して調べたところ、混入はほぼ無いことが確認できた。以上の結果より我々の構築したライブラリーが有用であるとの確証を得たので、それぞれのクローンについてヒト/マウス雑種細胞由来のDNAを用いて染色体マッピングを行ないクローンの由来したDNA断片について染色体座位に特異性がないかを検討している。
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[Publications] Wada-Kiyama,Y.and Kiyama,R.: "An intrachromosomal repeating unit based on DNA bending." Molecular & Cellular Biology. 16. 5664-5673 (1996)
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[Publications] Wada-Kiyama,Y.and Kiyama,R.: "Conservation and periodicity of DNA bend sites in eukaryotic genomes." DNA Research. 3. 25-30 (1996)
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[Publications] Kiyama,R.and Oishi,M.: "In vitro transcription of a poly(dA).poly(dT)-containing sequence is inhibited by interaction between the template and its transcripts." Nucleic Acids Research. 24. 4577-4583 (1996)
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[Publications] Inoue,S.et al.: "Construction of highly extensive polymorphic DNA libraries by in-gel competitive reassociation procedure." Genomics. 31. 271-276 (1996)
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[Publications] 木山亮一: "分子生物学プロトコール[In-gel hybridization]" 南江堂(印刷中), (1997)
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[Publications] 木山亮一: "Surgery Frontier[三重鎖DNA]" メディカルレビュー社(印刷中), (1997)
