リボサイムを用いた腫瘍細胞上補体制御膜因子の不活化による免疫原性の増強

1996 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 08266259
• Research Institution: Nagoya City University
• Principal Investigator: 岡田 則子 名古屋市立大学, 医学部, 助手 (20160682)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 土肥 名月 名古屋市立大学, 医学部, 技官 (60260791) ; 岡田 秀親 名古屋市立大学, 医学部, 教授 (30160683)
• Keywords: リボザイム / 5I2抗原 / 補体制御膜因子 / 腫瘍細胞 / DAF / MCP / 補体反応

Research Abstract

1。ラットの種特異的補体制御膜因子である5I2抗原を発見し、そのcDNAもクローニングすることができたので、腫瘍細胞膜上への5I2抗原の発現を抑制し、自己(同種)補体の反応を許すようにさせる方法して、5I2抗原の遺伝子を特異的に攻撃するリボザイムの開発を試みた。5I2抗原のcDNAの塩基配列を解析し、ハンマーヘッド型のリボザイムの標的とするのに適当と考えられる塩基配列を探索した。それに基づきリボザイムの合成を行った。5I2抗原cDNAのin vitro transcriptを作り、このリボザイムを作用させたところtranscriptのmRNAを特異的に切断することが確かめられた。
2。マウスのDAF (decay accelerating factor)のcDNAもクローニングすることができたので、発現組織についての検討を行ったが、精巣に強い発現が認められた。モルモットのMCP (membrane cofactor protein)のcDNAもクローニングし、その発現組織を検討したが、この場合には、より強い精巣への限局が認められた。一方、マウスの腫瘍細胞を用いて解析するため、マウスの強力な補体制御膜因子であるCnyに対するモノクローナル抗体を用いて腫瘍細胞膜上のCrryの機能をブロックしたときの補体反応性の解析を行った。その結果、Crryをブロックするだけでは不十分で、腫瘍細胞に対するIgM抗体などの反応を起こさせると強い補体反応を起こし、C3の沈着等を起こせることが分かった。
3。5I2抗原リボザイムは、in vitroのtranscriptを特異的に切断するので腫瘍細胞の細胞内で作用させて、5I2抗原蛋白の細胞膜への発現をどの程度まで抑制するかを検討中である。

Research Products

• [Publications] Nishikawa, K.: "Local inflammation caused by a monoclonal antibody which blocks the function of the rat membrane inhibitor of C3 convertase." J. Immunol.156. 1182-1188 (1996)
• [Publications] Fukuoka, Y.: "Molecular cloning of murine decay accelerating factor (DAF) by immunoscreening." Int. Immunol.8. 379-385 (1996)
• [Publications] Nakamura, M.: "Quantification of the CD55 and CD59, membrane inhibitors of complement on HIV-1 particles as a function of complement-mediated virolysis." Microbiol Immunol.40. 561-567 (1996)
• [Publications] Iwata, M.: "Complement plays an essential role in shock following intestinal ischaemia in rats." Clin. Exp. Immunol.106. 156-159 (1996)
• [Publications] Hosokawa, M.: "Molecular cloning of guinea pig membrane cofactor protein (MCP) : Preferential expression in testis." J. Immunol.157. 4946-4952 (1996)
• [Publications] Rogers, C. A.: "Expression and function of membrane regulators of complement on rat astrocytes in culture." Immunology. 88. 153-161 (1996)
• [Publications] Hayashi, S.: "Protection of guinea pig cells from rat complement-mediated lysis by the transfection of rat complement regulatory factor 5I2 gene." Xenotransplanmatation,. 3. 217-221 (1996)
• [Publications] Wu, X.: "IgM natural antibody against an asialo-oligosaccharide, gangliotetraose (Gg4) sensitizes HIV-I infected cells for cytolysis by homologous complement." Int. Immunol.8. 153-158 (1996)
• [Publications] Okada, N.: "Presence of IgM antibodies which sensitize HIV-1 infected cells to cytolysis by homologous complement in Iong term survivors of HIV-infection." Microbiol. Immunol.41 (in press). (1997)
• [Publications] Akatsu, H.: "Unique expression of HRF20 (CD59) in human nervous tissue." Microbiol. Immunol.41 (in press). (1997)
• [Publications] Nangaku, M.: "Overexpression of Crry prtects mesangeal cells from complement mediated injury." J. Am. Soc. Nephrol.(in press). (1997)
• [Publications] 野中真弓: "分子アレルギー学 補体の分子生物学(分担)" Medical Review社 (印刷中), (1997)