1996 Fiscal Year Annual Research Report
ヒト染色体セントロメア(αサテライトDNA)領域における高次ヌクレオソーム構造
| Project/Area Number |
08274207
|
|---|
| Research Institution | Nagoya University |
|---|
Principal Investigator |
依田 欣哉 名古屋大学, 生物分子応答研究センター, 助手 (30126916)
|
|---|
| Keywords | ヒト染色体 / セントロメア領域 / α-サテライトDNA / CENPB / ヌクレオソーム構造 / ポジショニング / CENPB二量体 / CENPA |
|---|
| Research Abstract |
ヒトセントロメア領域を構成するαサテライトDNAとセントロメアタンパク質CENP-A、CENP-Bおよびコアヒストンとの相互作用によって構成されるセントロメア特異的ヌクレオソーム構造を解析し、これまでに以下の点を明らかにした。(i)CENP-Bboxの基本的分布様式が2mer毎に一回の規則的配列である(論文受理)。(ii)in vitro,in vivo解析からCENP-Bがヌクレオソーム構造のポジショニングを誘起する(論文投稿中)。(iii)CENP-A及びヒストンH2A、H2B、H3、H4を高度に精製しヌクレオソーム構造の再構成を行い、CENP-AがヒストンH3としての機能を持つことを示した(論文準備中)。本年度はこれらの成果を踏まえて、(i)HeLa細胞単離核を用いてDNaselフットプリント解析を行いCENP-Bbox周辺のヌクレオソーム構造がDNAヘリックスの回転ユニットに関しても厳密にポジショニングしていることを証明した(ロ-テ-ショナルポジショニング)。(ii)精製CENP-Aを用いたヌクレオソーム再構成系においてMNaseフットプリント解析を行い、CENP-BboxにCENP-Bが結合した条件下では、コアヒストンを用いたときと全く同一の超感受性部位がCENP-Bbox周辺に誘起されることを示した。この結果はさらにvivoに近い再構成系を組み立てることに成功したことを意味するもので意義深いと考えている。(iii)CENP-A抗体の作製を試みている。
|
-
[Publications] 依田欣哉等: "Contromer ProteinB of African Grean Monkey Cells : Gene Structure,Cellular Eypression,and Amtromere Lecalization" Molecular and Cellular Biology. 16・9. 5169-5177 (1996)
-
[Publications] 網代,依田等: "Arleration of cell Oycle-clependent Pistone Phosphorylations by Akadaic Acid Induction of Mitosis Specific H3 Phyosphorylation and Chromation Condensetion in Mommeliare Lnterphare cells" Journal of Biological Chemistry. 271. 13197-13201 (1996)
-
[Publications] 岡崎、舛本、北川、池野、依田ら: "Properfies and Interaction of CENPB and Contromere Satellite DNA in Mammefiar Cells" Chromosome Segregation and Aneuphoidy III. (印刷中). (1997)
-
[Publications] 依田欣哉、岡崎恒子: "Site Specific Base Relations in Human α-Satollite Monomer DNAs Are Associated with Regnlarly Distributed CENPB Bones" Chromosome Research. (印刷中). (1997)
-
[Publications] 依田欣哉、岡崎恒子: "Centromere Specific Nucleosome Structures in Human Cells" Keystone Symposium on Functional Organization of the Nucleus. (印刷中). (1997)
