1996 Fiscal Year Annual Research Report
色素性乾皮症C群蛋白質を中心とした染色体DNA損傷修復機構の解析
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08274211
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| Research Institution | Osaka University |
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Principal Investigator |
益谷 央豪 大阪大学, 細胞生態工学センター, 助手 (40241252)
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| Keywords | ヌクレオチド除去修復 / 色素性乾皮症 / XPC / HHR23B |
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| Research Abstract |
XPC-HHR23B複合体の機能を明らかにするために、それぞれの組み換え蛋白質を作成した。XPCとHHR23Bを含まない細胞抽出液を用いた無細胞系を構築して解析した結果、XPC単独では弱い修復反応しか行われず、HHR23Bの存在下で活性が促進された。HHR23Bの欠失細胞は、これまでのところ知られていないので、本研究により始めて、HHR23BのNERへの関与が示された。HHR23Bの様々な欠失変異蛋白質を作成し、XPCとの結合領域およびNERに必要な領域を調べたところ、XPC結合能をもつもののみがNER反応を促進した。このことから、HHR23BはXPCとの結合を介してNERに関与していることが示された。しかし、HHR23BのXPC結合領域以外の欠失は、NERへの影響が少なく、HHR23BがNER以外の機能をもつことを示唆しており、現在さらに解析を進めている。XPC-HHR23B複合体は、強いDNA結合能をもち、ゲルシフト法およびBIAcoreシステムを用いた結果から、一本鎖DNA<二本鎖DNA<UV照射した二本鎖DNAに結合した。UV照射DNAへの親和性は、組み換えXPC単独ではほとんど見られず、HHR23Bの共存下でのみ検出された。この結果より、XPC-HHR23Bは、複合体として染色体DNA損傷の認識を行う可能性が示唆された。現在、これらの解析に加え、XPC-HHR23Bの細胞内の挙動についても解析を進めている。
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[Publications] van der Spek,P.J.et al.: "XPC and human homologs of RAD23:intracellular localization and relationship to other nucleotide excision repair complexes" Nud.Acids Res.24. 2551-2559 (1996)
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[Publications] Sugasawa,K.et al.: "HHR23B,a human RAD23 homologue,stimulates XPC protein in nucleotide excision repair in vitro" Mol.Cell.Biol.16. 4852-4861 (1996)
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[Publications] Ito,K.et al.: "c-jun stlmulates origin-dependent DNA unwinding by polyomavirus large T antigen" EMBO J.15. 5636-5646 (1996)
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[Publications] Saijo,M.et al.: "Sequential binding of DNA repair proteins RPA and ERCC1 to XPA in vitro" Nucl.Acids Res.24. 4719-4724 (1996)
