1996 Fiscal Year Annual Research Report
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08274224
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| Research Institution | National Cancer Center Research Institute and Research Center for Innovative Oncology, National Cancer Center Hospital East |
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Principal Investigator |
田矢 洋一 国立がんセンター研究所, 生物学部, 室長 (60133641)
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| Keywords | RB蛋白質 / 細胞核 / Cdk4 / サイクリンD1 / Cdk2 / サイクリンE |
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| Research Abstract |
RB蛋白質の細胞増殖抑制能は細胞周期特異的リン酸化で制御されている。一方で、RB蛋白質は何らかの核の構造体と結合していて、その結合もRB蛋白質のリン酸化で制御されているるらしいが、実体は不明である。本研究はその解明を目指した。そして、目的のために、我々が作製した、RB蛋白質のリン酸化サイト特異的抗体を用いることを考えた。
その結果、次のような研究成果が得られた。先ず、RB蛋白質のリン酸化を行う酵素について詳細な解析を行った結果、Cdk4-サイクリンD1によるリン酸化の共通モチーフがCdk2-E/Aによるリン酸化のそれとは異なること、さらに、RB蛋白質上の12-13カ所のリン酸化サイトのうち少なくともSer780は、細胞周期において、Cdk4-サイクリンD1によって特異的にリン酸化されることを明らかにした。逆に、Thr356は、Cdk4-サイクリンD1によってはリン酸化されないけれどもCdk2-E/Aによってリン酸化されるサイトらしいことをつきとめつつある。
また、我々は、リン酸化されたSer780を含む、13カ所すべての推定リン酸化サイトに対応する抗体を、化合合成したペプチドを抗原として用いて作製した。同調化したT98G細胞で調べると、これらの抗体は、リン酸化RB蛋白質を細胞周期の異なった時期に検出した。
さらに、こうしたリン酸化サイト特異的な抗体を用いて、RB蛋白質のどのサイトがリン酸化された時にRB蛋白質が核の構造体から解離するのかを解析中である。
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[Publications] Kitagawa,M.et al.: "The consensus motif for phosphorylation by cyclin D1-Cdk4 is different from that for phosphorylation by cyclin A/E-Cdk2." EMBO J.15. 7060-7069 (1996)
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[Publications] Taya,T.: "RB-kinases and RB-binding proteins : new points of view." Trends Biochem.Sci.22. 14-17 (1997)
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[Publications] Higashi,H.et al.: "Cyclin-dependent kinase-2 (Cdk2) forms an inactive complex with cyclin D1 since Cdk2 associated with cyclin D1 is not phosphorylated by Cdk7-cyclin H" Eur.J.Biochem.237. 460-467 (1996)
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[Publications] Taya,Y.et al.: "Cdk4-cyclin D1 and Cdk2-cyclin E/A phosphorylate different sites in the RB protein." Genomic Instability and Immortality in Cance. (in press).
