1996 Fiscal Year Annual Research Report
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08407011
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Grant-in-Aid for Scientific Research (A)
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| Research Institution | International Medical Center of Japan |
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Principal Investigator |
竹田 美文 国立国際医療センター, 研究所, 所長 (30029772)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
山崎 伸二 国立国際医療センター, 研究所, 室長 (70221653)
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| Keywords | コレラ毒素 / 水チャネル / AQP / O139コレラ菌 / O22コレラ菌 / O抗原 |
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| Research Abstract |
1.コレラ毒素の水チャネルAQPに対する作用を明らかにすることを目的とし、以下の成果を得た。ヒト小腸mRNAを鋳型とし、AQPファミリーの保存領域のプライマーを用いてRT-PCRを行ったところ、既知の分子AQP-1、-3および-4の断片が得られた。次にこれらをプローブとした小腸cDNAライブラリーのスクリーニング、及びRT-PCRにより、これらAQPの完全長cDNAをクローニングし、転写ベクターおよび発現ベクターに組み込んだ組み換え体を構築した。転写ベクターに組み込んだAQP cDNAからcRNAを調整し、アフリカツメガエルの卵に注射し、卵膜上にAQP分子を発現させる系を確立した。AQP cRNAを注射した卵を低張液に入れビデオモニタで観察すると、水を注射した対照群と比較して有意に水透過性が上昇した。また、発現ベクターに組み込んだAQP cDNAを大腸菌内で発現させ、AQPの大量精製を行い抗体を調整した。
2.O22コレラ菌のO抗原合成遺伝子領域約45kbの全塩基配列を決定し、オープンリーデングフレーム(ORF)を推定した。その結果、O抗原合成遺伝子領域においてO139コレラ菌にはO139特異的な領域8kbが存在しており、その領域内にバクテリオファージ由来の配列が存在していることはすでに明らかになっていたが、O22コレラ菌にも、O22特異的な領域6kbが存在していることが明らかになった。このO22特異的な領域には6種類のORFが存在しており、そのうちの5種類が糖転移酵素をコードしていた。また、O22コレラ菌のO抗原合成遺伝子領域約45kb内に挿入配列が2カ所存在していたが、その挿入配列はO22コレラ菌のゲノムDNA上に少なくとも15以上存在していた。またこの挿入配列はコレラ菌O22とO93とO150にのみ存在していた。
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[Publications] A.K.Mukhopadhyay: "Temporal shifts in traits of Vibrio cholerae strains isolated from hospitalized patients in Calcutta : A 3-year (1993 to 1995) Analysis" J.Clinical Microbiology. 34. 2537-2543 (1996)
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[Publications] R.Mitra: "Resurgence of Vibrio cholerae O139 Bengal with altered antibiogram in Calcutta,India" Lancet. 348. 1181 (1996)
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[Publications] S.Yamasaki: "Cryptic appearance of a new clone of vibrio cholerae serogroup O1 biotype eltor in Calcutta,India" Microbiology and Immunology. 41. 1-6 (1997)
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[Publications] S.Yamamoto: "Mutants in the ADP-ribosyltransferase cleft of cholera toxin lack diarrhoeagenicity but retain adjuranticity" J.Experimental Medicine. (印刷中). (1997)
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[Publications] S.Yamamoto: "A nontoxic mutant of cholera toxin elicits Th2-type responses for enhanced mucosal immunity" Proc.National Academy of Sciences,US. (印刷中). (1997)
