1997 Fiscal Year Annual Research Report
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08407011
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| Research Institution | Research Institute, International Medical Center of Japan |
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Principal Investigator |
竹田 美文 国立国際医療センター, 研究所, 所長 (30029772)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
山崎 伸二 国立国際医療センター, 研究所, 室長 (70221653)
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| Keywords | 腸管感染症菌 / 下痢発症機構 / 水チャネル分子 / AQP / コレラ毒素 |
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| Research Abstract |
腸管感染症原因菌による下痢発症の機構を明らかにすることを目的とし、小腸上皮細胞膜の水チャネル分子(aquaporin,AQP)に対するコレラ毒素の作用の解析を行った。ヒト小腸からRT-PCR法によりクローニングしたAQP1、AQP3およびAQP4のcDNAをin vitro転写し、得られたcRNAをアフリカツメガエル卵中で発現させた。このAQP発現卵をコレラ毒素で処理し、その後低張液中に移しビデオモニタで体積変化を継時的に記録する方法で、AQPの水透過性がコレラ毒素処理により変化するかどうかを調べた。その結果コレラ毒素は、AQP1の水透過性に対しては影響を与えなかったのに対し、AQP3には抑制的に、またAQP4には逆に促進的に作用する傾向が見られた。コレラ毒素の代わりにアデニル酸シクラーゼの促進剤であるforskolinで処理したところ、コレラ毒素処理群と全く同じ傾向が見られた。したがってコレラ毒素によるAQp3の水透過性抑制およびAQP4の水透過性促進には、アデニル酸シクラーゼの活性化が関与していることが示唆された。それぞれのAQPがリン酸化されているか否かは不明であるが、現在各AQPに対するポリクローナル抗体を作成中であり、これが得られればAQP発現卵に^<32>Pリン酸存在下でコレラ毒素を作用させ、免疫沈降後SDS-PAGEによりAQPのリン酸化が起こっているか否かを調べることができると考えている。
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[Publications] R.Mitra: "Resurgence of Vibrio choleral 0139 Bengal with altered antibiozrain in Calcutta,India" Lancet. 348. 1181- (1996)
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[Publications] S.Yamasaki: "Cryptic appearance of a new clone of Vibrio cholerde serogroup 01 biotype Elior in Calcutta,India" Microbiol.Immunol.41. 1-6 (1997)
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[Publications] S.Yamamoto: "Mutants in the ADP-ribosyltransferase cleft of cholera toxin lack diarrheagenicity but retain adjuvanticity" J.Exp.Med.185. 1203-1210 (1997)
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[Publications] S.Yamamoto: "A nontoxic mutant of cholera toxin elicits Th2-type responses for enhanced mucosal immunity" Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 94. 5267-5272 (1997)
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[Publications] J.Yamaoka: "Loss of biological activity due to Glu→Arg mutation at residue II of the B subunit of cholera toxin" Microb.Pathog. 23. 297-302 (1997)
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[Publications] K.Hoshino: "Development and evaluation of a multiplex PCR assay for rapid detection of toxigenic Vibrio choleral 01 and 0139" FEMS Immunol.Med.Microbiol.(in press). (1998)
