1996 Fiscal Year Annual Research Report
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08407072
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Grant-in-Aid for Scientific Research (A)
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| Research Institution | Osaka University |
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Principal Investigator |
花岡 文雄 大阪大学, 細胞生体工学センター, 教授 (50012670)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
前川 隆文 大阪大学, 細胞生体工学センター, 助手 (90273721)
益谷 央豪 大阪大学, 細胞生体工学センター, 助手 (40241252)
大熊 芳明 大阪大学, 細胞生体工学センター, 助教授 (70192515)
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| Keywords | DNA修復 / ヌクレオチド除去修復 / 色素性乾皮症 / XPC蛋白質 / TFIIH / XPG蛋白質 / p53蛋白質 |
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| Research Abstract |
研究代表者および研究分担者は、哺乳類細胞のヌクレオチド除去修復(NER)の分子機構解明を目指して、以下に述べる研究を行った。
1)色素性乾皮症(XP)C群蛋白質の機能解析
XPC蛋白質複合体のNERにおける役割を明らかにするために、その構成成分の一つであるHHR23B蛋白質の様々な欠損変異体を作成し、XPC蛋白質との結合部位が分子のC末端側に近い約55アミノ酸の領域にあること、そして同じ領域がXPC蛋白質のNER活性の促進にも必須であることを明らかにした。
2)転写と修復のカップリングの解析と修復蛋白質複合体の分離
NERに必要な蛋白質因子(XPB、XPDなど)を含む基本転写因子TFIIHを精製し、これが他のNER蛋白質(XPGおよびXPC)と相互作用していることを見い出した。
3)C群以外のXP蛋白質の精製と新たな修復因子の同定
昆虫細胞の多量発現系を用い、XPG蛋白質を単一なまでに精製し、構造特異的なエンドヌクレアーゼ活性も検出した。
4)ヌクレオチド除去修復を制御する機構の解析
やはり昆虫細胞の多量発現系を用いて精製したp53蛋白質の無細胞NER系に対する影響を調べたところ、p53蛋白質の量に依存した促進が見られた。無細胞NER系を損傷部位の切断までと、それ以降のDNA合成反応の2段階に分けて調べたところ、p53蛋白質は、後者の段階を促進していることが判明した。
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Research Products
(6 results)
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[Publications] Ikehata,H.et al.: "Incubation at the nonpermissive temparature induces deficiencies in UV resistance and mutagenesis in mouse mutant cells expressing a tamperature-sensitive ubiquitin-activating enzyme E1." Mol.Cell.Biol.17. 1484-1489 (1997)
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[Publications] Osada,H.et al.: "Screening of cell cycle inhibitors from microbial metabolites by a bioassay using a mouse cdc2 mutant cell line tsFT210." Bioorg.Med.Chem.5. 193-203 (1997)
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[Publications] Mizuno,T.et al.: "Identification of the nuclear localization signal of mouse DNA priniase:nuclear transport of p46 subunit is facilitated by intaraction with p54 subunit." J.Cell.Sci.109. 2627-2636 (1996)
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[Publications] Ito,K.et al.: "C-Jun stimulates origin-dependent DNA unwinding by polyomavirus large T antigen." EMBO J.15. 5636-5646 (1996)
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[Publications] Sugasawa,K.et al.: "HHR23B,a human Rad23 homolog,stimulatas XPC protein in nucleotide axcision repair in vitro." Mol.Cell.Biol.16. 4852-4861 (1996)
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[Publications] Van der Spek.P.J.et al.: "XPC and human homologs of RAD23:intracellular localization and relationship to other nucleotide axcision repair complexes." Nucl.Acids Res.24. 2551-2559 (1996)
