1997 Fiscal Year Annual Research Report
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08407072
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| Research Institution | Osaka University |
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Principal Investigator |
花岡 文雄 大阪大学, 細胞生体工学センター, 教授 (50012670)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
前川 隆文 大阪大学, 細胞生体工学センター, 助手 (90273721)
益谷 央濠 大阪大学, 細胞生体工学センター, 助手 (40241252)
大熊 芳明 大阪大学, 細胞生体工学センター, 助教授 (70192515)
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| Keywords | DNA修復 / ヌクレチオド除去修復 / 色素性乾皮症 / XPC蛋白質 / TFIIH / XPG蛋白質 |
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| Research Abstract |
研究代表者および研究分担者は、哺乳類細胞のヌクレオチド除去修復(NER)の分子機構解明を目指して,以下に述べる研究を行った。
1)色素性乾皮症(XP)C群蛋白質の機能解析
XPC蛋白質複合体のNERにおける役割を明かにするために、その構成成分の一つであるHHR23B蛋白質とその類縁蛋白質であるHHR23A蛋白質のXPC蛋白質との関係を調べた。その結果、HHR23A蛋白質もHHR23B蛋白質と同様に、XPC蛋白質と複合体を形成し、NERにおいて機能することを見出した。また精製蛋白質を用いた再構成NER系においても、HHR23B蛋白質およびHHR23A蛋白質がXPC蛋白質のNER活性を促進することを示した。
2)転写と修復のカップリングの解析
NERに必要な蛋白質因子(XPB、XPDなど)を含む基本転写因子TFIIHのコンポーネントの中で、p62及びXPBが他のNER蛋白質(XPGおよびXPC)と直接相互作用していることを明らかにした。
3)新たな修復因子の同定
酵母の2ハイブリッドシステムを用い、HHR23B蛋白質と相互作用する因子を検索した。その結果、26Sプロテアソームの構成因子の一つであるs5a蛋白質が相互作用する因子として見出された。これら2つの蛋白質は、細胞抽出液中でも相互作用していた。
4)C群以外のXP蛋白質の精製と新たな修復因子の同定
XPF蛋白質とERCCI蛋白質とを昆虫細胞の系で共発現させ、活性のある形で精製することに成功した。
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[Publications] Sakamoto,A.at al.: "Botle hypercrophic and dilated casdiomyopathies are caused by nutation of the same gane 5-sarooglycan,in hamstor:An dnimal wodel of disragted dystrophin-assoolated glycaprltein cemplax." Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 94. 13873-13878 (1997)
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[Publications] Withors-Ward,E.S.et al.: "Human immunede ficioncy rirus type 1 Vpc interacts with HHR23A,a cellular protein implicated in nuclaetide excision DNA repair." J.Virol.71. 9732-9742 (1997)
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[Publications] Masutani,C.et al.: "Identification and charactoriration of XPC-binding domatu of hHR23B." Mol.Cell.Biol.17. 6915-6923 (1997)
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[Publications] Sugasawa,K.et al.: "Two humnau homologues of Rad23 are functionalty inturchangaable in complex farmation and scimulation of XPC repair activity." Mol.Cell.Biol.17. 6924-6931 (1997)
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[Publications] Sasaki,H.at al.: "Dependence of induction of interphase death of Chinase hamster ovary cells exposed to auslerated heany ious on linear energy traisfer." Radiation Ras.148. 449-454 (1997)
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[Publications] Ohkuma,Y.: "Multiple functions of general transcription factors TFIIE and TFIIH in transcription:Possible points of regulation by trans-acting factors." J.Biochem.122. 481-489 (1997)
