1996 Fiscal Year Annual Research Report
血管内皮のShear Stress感受性遺伝子のクローニングと新規活性物質の探索
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08408039
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Grant-in-Aid for Scientific Research (A)
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| Research Institution | The University of Tokyo |
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Principal Investigator |
安藤 譲二 東京大学, 医学部, 客員助教授 (20159528)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
神谷 瞭 東京大学, 医学部, 教授 (50014072)
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| Keywords | 内皮細胞 / 壁ずり応力 / 血行力学因子 / mRNA / 遺伝子 |
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| Research Abstract |
本年度はshear stressに感受性のある内皮遺伝子の総数を評価するため、mRNAのdifferential displayを実施した。具体的には培養ヒト臍帯静脈内皮細胞に流れ負荷装置で15dynes/cm^2のshear stressを6時間作用させたサンプルと静的状態に置いたサンプルからそれぞれ総RNAを抽出した。それを逆転写しcDNAにしてから5'側に20種類、3'側に4種類のプライマーを用い、計80通りの組み合わせでpolymerase chain reactionsで増幅し、電気泳動を行った。増幅されたcDNAのバンドの放射活性をイメージアナライザーで測定し、shear stressで二倍以上に増加する遺伝子(up-regulated gene)、および半分以下に減少する遺伝子(down-regulated gene)をshear stress感受性遺伝子とした。その結果、検出できた1507の遺伝子の内、60(up-regulated gene33,down-regulated gene27,全体の約4%)がshear stress感受性であることが判明した。通常、細胞が発現する遺伝子の数は1万五千と言われているので、概ね内皮にはshear stress感受性遺伝子が600程存在することになる。今後、電気泳動ゲルのバンドからshear stress感受性遺伝子をクローニングし、塩基配列をDNAシーケンサで決定してgene bankのdata baseから既知と未知の遺伝子を分け、未知の遺伝子に関しては遺伝子の全長をさらにクローニングする予定である。
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[Publications] J.Ando: "Differential display and cloning of shear stress-responsive messenger RNAs in human endothelial cells." Biochem.Boiphys.Res.Commun.225. 347-351 (1996)
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[Publications] Y.Wang: "Contribution of sustained Ca^<2+> elevation for nitric oxide production in endothelial cells and subsequent modulation of Ca2+ transient in vascular smooth muscle cells in coculture." J.Biol.Chem.271. 5647-5655 (1996)
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[Publications] H.Tsuboi: "Flow stimulates ICAM-1 expression time-and shear stress-dependently in human endothelial cells." Biochem.Boiphys.Res.Commun.206. 988-996 (1995)
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[Publications] Y.Takada: "Fluid shear stress increases the expression of thrombomodulin by cultured human endothelial cells." Biochem.Biophys.Res.Commun.205. 1345-1352 (1994)
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[Publications] W.Yang: "Exogenous nitric oxide inhibits proliferation of cultured vascular endothelial cells." Biochem.Biophys.Res.Commun.203. 1160-1167 (1994)
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[Publications] J.Ando: "Shear stress inhibits the adhesion of cultured mouse endothelial cells to lymphocytes by down-regulating VCAM-1 expression." Am.J.Physiol.267. C679-C687 (1994)
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[Publications] J.Ando: "Fluid shear stress differentialy modulates adhesion molecule expression in human vascular endothelial cells.In“Organ Microcirculation:Bridging between Basic and Clinical Sciences",M.Tshuchiya et al.eds.," Excerpta Medica,Tokyo, 8 (1996)
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[Publications] J.Ando: "Flow-dependent regulation of gene expression in vascular endothelial cells." Jpn.Heart J., 14 (1996)
