1996 Fiscal Year Annual Research Report
植物ホルモン・オーキシン生合成に関わる酵素および遺伝子に関する研究
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08456173
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
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| Research Institution | Kyoto University |
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Principal Investigator |
小林 達彦 京都大学, 農学部, 講師 (70221976)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
清水 昌 京都大学, 農学部, 教授 (70093250)
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| Keywords | 植物ホルモン / インドール酢酸 / ニトリラーゼ / オーキシン / 遺伝子 |
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| Research Abstract |
現在、成果の出ている実験結果のみ以下に記載させていただく。
Alcaligenes faecalisのインドール酢酸(IAA)生合成に関わる(インドールアセトニトリルからIAAへの加水分解反応を触媒する酵素)ニトリラーゼの構造遺伝子の構造機能解析を行った。既に本申請者や他のグループによって報告されている数種類のニトリラーゼの一次構造間で相同性が認められない全長のおよそ15%にあたるカルボキシル末端領域にターゲットを絞り、A.faecaisのニトリラーゼ遺伝子のアミノ末端領域と、本申請者らが既にクローン化しているRhodococcus rhodochrous J1もしくは、Rhodococcus rhodochrous K22のニトリラーゼ遺伝子のカルボキシル末端領域を融合した2種類のキメラ遺伝子をPCR法を用いて構築した。キメラ遺伝子は、SDS-PAGE上で全タンパク質の50%近くを占めるほど大量に大腸菌内で発現したが、キメラ酵素の基質特異性はネイティブな酵素とほとんど変わりがなかったことにより、ニトリラーゼの相同性の内カルボキシル末端領域は基質特異性には影響を与えていないと考えられる。また、カルボキシル末端領域を欠損させたA.faecalisのニトリラーゼ活性は、微弱ながら認められたがネイティブな酵素と比較して激減そたことにより、カルボキシル末端領域は酵素の構造維持あるいは触媒機能に何らかの役割を強く示唆された。
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[Publications] Komeda,H.,Kobayashi,M. & Shimizu,S.: "A novel gene cluster including the Rhodococcus rhodochrous J1 nhlBA genes encoding a low molecular mass nitrile hydratase (L-NHase) induced by its reaction product" J.Biol.Chem.271. 15796-15802 (1996)
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[Publications] Komeda,H.,Kobayashi,M.& Shimizu,S.: "Characterization of the gene cluster of a high-molecular-mass nitrile hydratase (H-NHase) induced by its reaction in Rhodococcus rhodochrous J1" Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 93. 4267-4272 (1996)
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[Publications] Komeda,H.,Hori,Y.,Kobayashi,M.&Shimizu,S.: "Transcriptional regulation of the Rhodococcus rhodochrous J1 nitA gene encoding a nitrilase" Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 93. 10572-10577 (1996)
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[Publications] Koboyashi,M.,Fujita,T.& Shimizu,S.: "Hyperinduction of nitrile hydratase acting acting on indole-3-acetonitrile in Agrobacterium tumefaciens" Appl.Microbiol.Biotechnol.45. 176-181 (1996)
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[Publications] Yamada,H.& Kobayashi,M.: "Nitrile hydratase and its application to industrial production of acrylamide" Biosci.Biotech.Biochem.60. 1391-1400 (1996)
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[Publications] Kawashima,H.,Kouzaki,N.,Kobayashi,M.& Shimizu,S.: "Biosynthesis of trans fatty acids in a fungus, Cladosporium sphaerospermum, and some bacteria isolated from fish viscera" Biosci.Biotech.Biochem.60. 1888-1890 (1996)
