1996 Fiscal Year Annual Research Report

Ras蛋白質の翻訳後修飾(ファルネシル化)のエフェクター活性化における意義

Research Project

Project/Area Number	08457038
Research Institution	Kobe University School of Medicine
Principal Investigator	片岡徹神戸大学, 医学部, 教授 (40144472)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	片岡有里子神戸大学, 医学部, 助手 (50233739) 苅谷研一神戸大学, 医学部, 助教授 (40263371)
Keywords	rasがん遺伝子 / GTP結合蛋白質 / 翻訳後修飾 / Rap1A / がん抑制遺伝子 / rafがん遺伝子 / アデニル酸シクラーゼ / シクラーゼ結合蛋白質
Research Abstract	1,我々の研究で発見したRas蛋白質とRaf-1蛋白質Cysteine-rich領域(CRR)との間のRasの翻訳後脂質修飾(ファルネシル化)依存性の新しい相互作用機構に基づき,がん抑制遺伝子産物Rap1A(Krev-1)の作用機構を解明した。Rap1Aは、Raf-1CRRに対して翻訳後修飾依存性に非常に強い親和力を持ち、Ras存在下でRas-Rap1A-Raf-1の三者複合体を形成することにより、RasのRaf-1CRRへの結合を阻害する事により、RasによるRaf-1活性化を抑制することがわかった。RasとRap1Aの相拮抗する活性が、両者のアミノ酸番号31番の1残基の相互置換(グルタミン酸とリジンの置換)によって決定されることを示した。 2,出芽酵母アデニル酸シクラーゼのRas蛋白質による活性化において、Rasの翻訳後脂質修飾(特にファルネシル化)が必須である分子機構を明らかにした。Rasのファルネシル化は、アデニル酸シクラーゼとの結合親和力には影響が無いが、Rasによるシクラーゼ活性化に必要である。この活性化には、アデニル酸シクラーゼがシクラーゼ結合蛋白質CAPと結合していることが必要であり、CAPを結合していないアデニル酸シクラーゼに試験管内でCAPを結合させることにより、Ras翻訳後修飾のシクラーゼ活性化効果を再構成することに成功した。この結果は、CAPがRasに付加されたファルネシル基の受容体であり、翻訳後修飾の影響を仲介する可能性を示したので、「蛋白質に付加された翻訳後修飾基の受容体蛋白質」という新概念を提唱した。 3.蛍光偏光度測定法によりファルネシル化されたRasのカルボキシル末端合成ペプチドとの結合を測定した所、CAPについては結合測定に成功したが、Raf-1CRRについては低親和力のため不可能であった。

Research Products
(6 results)

All Other

All Publications (6 results)

[Publications] M.Shinkai et al.: "Difference in the mechanism of interaction of Raf-1 and B-raf with H-Ras." Biochem.Biophys.Res.Comm.223巻3号. 729-734 (1996)
[Publications] F.Shima et al.: "Effect of association with adenylyl cyclase-associated protein on the interaction of yeast adenylyl cyclase with Ras protein." Mol.Cell.Biol.17巻3号. 1057-1064 (1997)
[Publications] K.Kariya et al.: "C.elegans homologs of ralGDS,AF-6,Cdc25 and phospholipase Cβ interact with Let-60." Worm Breeder′s Gazette. 14巻5号. 34-35 (1997)
[Publications] M.Okazaki et al.: "Synergistic activation of c-fos promoter activity by Raf and Ral GDP dissociation stimulator." Oncogene. 14巻3号. 515-521 (1997)
[Publications] C-D.Hu et al.: "Coassociation of Rap1A and Ha-Ras with Raf-1 N-terminal region interferes with Ras-dependent activation of Raf-1." J.Biol.Chem.272巻(in press). (1997)
[Publications] C.Yanagihara et al.: "Association of elongation factor 1α and rebosomal protein L3 with the proline-rich region of yeast adenylyl cyclase-associated protein." Biochem.Biophys.Res.Comm.233または234巻(in press). (1997)

1996 Fiscal Year Annual Research Report

Ras蛋白質の翻訳後修飾(ファルネシル化)のエフェクター活性化における意義

Principal Investigator

片岡 徹 神戸大学, 医学部, 教授 (40144472)

Research Products

[Publications] M.Shinkai et al.: "Difference in the mechanism of interaction of Raf-1 and B-raf with H-Ras." Biochem.Biophys.Res.Comm.223巻3号. 729-734 (1996)

[Publications] F.Shima et al.: "Effect of association with adenylyl cyclase-associated protein on the interaction of yeast adenylyl cyclase with Ras protein." Mol.Cell.Biol.17巻3号. 1057-1064 (1997)

[Publications] K.Kariya et al.: "C.elegans homologs of ralGDS,AF-6,Cdc25 and phospholipase Cβ interact with Let-60." Worm Breeder′s Gazette. 14巻5号. 34-35 (1997)

[Publications] M.Okazaki et al.: "Synergistic activation of c-fos promoter activity by Raf and Ral GDP dissociation stimulator." Oncogene. 14巻3号. 515-521 (1997)

[Publications] C-D.Hu et al.: "Coassociation of Rap1A and Ha-Ras with Raf-1 N-terminal region interferes with Ras-dependent activation of Raf-1." J.Biol.Chem.272巻(in press). (1997)

[Publications] C.Yanagihara et al.: "Association of elongation factor 1α and rebosomal protein L3 with the proline-rich region of yeast adenylyl cyclase-associated protein." Biochem.Biophys.Res.Comm.233または234巻(in press). (1997)

片岡徹神戸大学, 医学部, 教授 (40144472)