1996 Fiscal Year Annual Research Report
アラキドン酸酸素添加酵素のアイソザイムの分子生物学的研究
| Project/Area Number |
08457039
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
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| Research Institution | The University of Tokushima |
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Principal Investigator |
山本 尚三 徳島大学, 医学部, 教授 (50025607)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
鈴木 啓史 徳島大学, 医学部, 助手 (80253194)
林 陽子 徳島大学, 医学部, 助手 (60035441)
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| Keywords | アラキドン酸 / シクロオキシゲナーゼ / リポキシゲナーゼ / アイソザイム / プロスタグランジン / 酵素誘導 / 転写調節 / 生理活性物質 |
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| Research Abstract |
私達はリポキシゲナーゼの1つの12-リポキシゲナーゼに、基質特異性と一次構造の違いで区別される2種のアイソザイムが、種々の動物種と細胞種に存在することを明らかにして来た。また、シクロオキシゲナーゼには、従来知られていた酵素とは別のアイソザイムの存在が明らかにされ、従来のシクロオキシゲナーゼ-1(COC-1)に対してシクロオキシナーゼ-2(COX-2)と呼ばれている。こららのアラキドン酸酸素添加酵素のアイソザイムのそれぞれの遺伝子について、その転写調節機構を研究し、生理的病理的刺激による酵素の誘導と、細胞分化の過程での遺伝子発現の機構を明らかにするのが、本研究計画の目的である。
1) シクロオキシゲナーゼ-1遺伝子の転写調節因子:ヒト骨髄巨核芽球系白血病細胞(CMK)にTPAを与えると、1-2日の停滞期の後に酵素活性が上昇し始め、4日頃には当初の数倍に達する。COX-1が誘導されることは、mRNAと酵素蛋白の動態で確認された。COX-2は当初に一過性に出現した。現在トロンボポエチンによる細胞分化に伴うCOXの動きを追っている。
2) シクロオキシゲナーゼ-2遺伝子の転写調節因子:マウスMC3T3-E1細胞はTNFαによって、迅速で一過性の典型的なCOX-2の誘導を示す。NFkBとNF-IL6の関与を明らかにしつつあり、抗炎症性グルココルチコイドの抑制効果を調べている。
3) 血小板型12-リオポキシゲナーゼの転写調節の研究:先に私達がクローニングしたヒト赤白血病細胞(HEL)12-リポキシゲナーゼのcDNAを発現させて得たリコンビナント酵素を抗原として抗体を作り、それを使ってマウスの骨髄、小腸、皮膚などの血小板型12-リポキシゲナーゼの局在と、その細胞内分布を明らかにした。
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Research Products
(6 results)
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[Publications] H.Ikawa: "Arachidonate 12-lipoxygenase in porcine anterior pituiary cells:its localization and possible function in gonadotrophs" J.Endocrinology. 148. 33-41 (1996)
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[Publications] K.Kishimoto: "Suicide inactivation of porcine leukocyte 12-lipoxygenase associated with its incorporation of 15-hydroperoxy-5,8,11,13-eicosatetraenoic acid" Biochim.Biophys.Acta. 1300. 56-62 (1996)
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[Publications] Y.Harada: "Role of prostaglandin H synthase-2in prostaglandin E_2 formation in rat carrageenin-induced pleurisy" Prostaglandins. 51. 19-33 (1996)
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[Publications] M.Nakamura: "Subcellular localization of arachidonate 12-lipoxygenase and morphological effect of its overexpression on murine keratiocytes" Cell Tissue Research. in press.
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[Publications] N.Ueda: "Induction of cyclooxygenase-1 in a human megakaryoblastic cell line(CMK)differentiated by phorbol ester" Biochim.Biophys.Acta. 1344. 103-110 (1997)
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[Publications] 山本 尚三: "マウス骨芽細胞MC3T3-E1における脂肪酸シクロオキシゲナーゼの誘導" ビタミン. 70. 453-463 (1996)
