1996 Fiscal Year Annual Research Report
基底膜新コラーゲン鎖の構成する分子、会合体及び生物学的機能
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08457154
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
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| Research Institution | Okayama University |
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Principal Investigator |
二宮 善文 岡山大学, 医学部, 教授 (70126241)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
百田 龍輔 岡山大学, 医学部, 助手 (80263557)
大橋 俊孝 岡山大学, 医学部, 助手 (50194262)
吉岡 秀克 岡山大学, 医学部, 助教授 (00222430)
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| Keywords | IV型コラーゲン / 基底膜 / 遺伝子発現調節 / ES細胞 / 超分子会合体 / アルポート症候群 / 食道平滑筋腫 |
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| Research Abstract |
新しいIV型コラーゲン分子の会合様式を明かにし、その超分子会合体が作る基底膜構造が、各々の臓器における基底膜の機能とどのような関係しているかを知る目的で、平成8年度は、これらの6遺伝子がどのように発現制御されて生合成され、基底膜を構築するか、また疾患の基底膜形成の異常のメカニズムを中心に解析した。具体的には、
1)マウスCo14a6遺伝子発現調節機構の解析:α6(IV)遺伝子発現を見たところ、ホトとは異なって、択一的プロモーターで制御されている訳ではないことがわかった。
2)Co14a6遺伝子発現停止ES細胞の作成:マウス遺伝子Co14a6断片にNeo-tk遺伝子を挿入し、エクソン2を除いたコンストラクトを作成し、ES細胞にトランスフェクションし、相同的遺伝子組換え法によってCo14a6 null alleleを得ることができた。現在ヘテロ接合体、ホモ接合体において、顕著な形質変化が現われるか否かの詳細な検索を行っている。
3)IV型コラーゲン分子のα(IV)鎖構成と超分子会合体:α鎖特異的モノクローン抗体を用いた組織分布より、6α鎖が構成する分子種を推定することが出来た。その結果、α1(IV)とα2(IV)、α3(IV)とα4(IV)とα5(IV)そしてα5(IV)とα6(IV)の3種類の分子種が存在すると思われる。このことは、α鎖特異抗体を用いた二重染色によって、また、アルポート症候群などの遺伝性の疾患の症例を用いて染色することによって確かめることが出来た。
4)Alport症候群及びび慢性食道平滑筋腫の病因とα5(IV)及びα6(IV)遺伝子変異:入手したAlport症候群及びび慢性食道平滑筋腫合併例について、ゲノムDNA,リンパ球由来mRNAを用いてサザンブロット,SSCP,RT-PCRにより検索を試みた。その結果、COL4A5遺伝子のイントロンの一部、エクソン1、COL4A5とCOL4A6両遺伝子の上流部分、COL4A6遺伝子エクソン1′,イントロン1′、エクソン1、イントロン1、エクソン2そしてイントロン2の一部が欠失していることが判明した。
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[Publications] Sugihara K.: "Experimental Anti-GBM glomerular nephritis induced in rats byimmunization with syhthetic peptides based on six a chains of human type IV collagen." J.Pathol.178. 352-358 (1996)
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[Publications] Ljubimov A.V.: "Extracellular alterations in human corneas with bullous keratopathy." Invest.Ophthal mol.Vis.Sci.37. 997-1007 (1996)
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[Publications] Rauf S.: "Nephritogenicity and a-chain composition of NC1 fractions of type IV collagen from bovine renal basement membrane." Virchow Archiv. 428. 281-288 (1996)
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[Publications] Hino S: "Absence of α6(IV) collagen in kidney and skin of X-linked Alport syndrome." Pediatric Nephrology. 10. 742-744 (1996)
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[Publications] Ljubinov,A V: "Basement membrane abnormalities in human eye with diabetic retinopathy." J.Histochem.Cytochem.44. 1469-1479 (1996)
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[Publications] Megumi Kagawa: "Epitope-defined monoclonal antibodies against type-IV collagen for diagnosis of Alport's syndrome. (in press)" Nephrology Dialysis Transplantation. (1997)
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[Publications] Glew R.H.and Ninomiya Y.: "Clinical Studies in Medical Biochemistry" Oxford University Press,New York (in press), 1-449 (1997)
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[Publications] 二宮善文,渡辺明治,岡崎勲: "遺伝子とその発現 細胞外マトリックス-臨床医学への応用-" メヂカルレビュー社, (1996)
