相同的遺伝子組み換えによる白血病に対する遺伝子治療の基礎的検討

1996 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 08457275
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• Research Institution: Niigata University
• Principal Investigator: 高橋 益廣 新潟大学, 医療技術短期大学部, 教授 (90179531)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 古川 達雄 新潟大学, 医学部付属病院, 助手 (00272849) ; 小池 正 新潟大学, 医学部付属病院, 助教授 (30170161)
• Keywords: homologous recombination / leukemia / gene therapy / BCR-ABL oncogane / RT-PCR / Souther Blotting / Neo / Thymidine kinase

Research Abstract

白血病などの腫瘍細胞の異常癌遺伝子を正常な遺伝子に置き換えるには、homologous recombination法を用いた遺伝子導入を行う必要がある。我々は、あらかじめBCR-ABL融合癌遺子を導入することにより自律増殖能を獲得したマウス血液細胞株を用いて、homologous recombination法を応用して癌遺伝子の修正を試みた。(方法)homologous recombination用のプラスミッドpGDTKbcrNeoablreverseは、pGD210を基本にTKを組込み、BCR-ABLの間にNeoを組み込んだBCR-Neo-ABLをhomologous部位(BCR-ABL領域)の特異性を高めるために逆向きに挿入し直すことにより作成した。遺伝子導入細胞としてIL-3依存性マウス骨髄細胞株FDC-P2を用い、遺伝子導入は矩形波による電気パルス法で行った。pGDTKbcrNeoablreverse導入細胞の選択は、G418とgancyclovir両者の添加培養により行った。遺伝子導入とその発現の確認は、BCR-ABL、Neo、TKについて、PCRおよびRT-PCRにより、またhomologous recombinationの確認は、Southern Blot法で行った。(結果)FDC-P2に1コピーのBCR-ABL遺伝子の導入が確認されたクローンに対し、pGDTKbcrNeoablreverseを導入しG418とgancyclovir両者に耐性で、BCR-ABLを発現していないクローンが1つ樹立された。このクローンは本来獲得していた自律増殖が消失し、Southern Blot法でhomologous recombinationが確認された。(結論)homologous recombinationにより脱白血病化したと考えられるクローンが樹立された。

Research Products

• [Publications] Tobak. et al: "Profile of cell cycle in hematopoietic malignancy by DNAIRNA quantitation using 7AADIPY" Experimental Hematology. 24(8). 894-901 (1996)
• [Publications] Hanawa H. et al: "Novel analysis of minimal rasidual disease in leukemia with TCR beta rearrangement" Leukemia Research. (in press).
• [Publications] 鈴木訓充: "相同組換えによる異常遺伝子を標的とした遺伝子破壊の試み-増血器腫瘍への遺伝子治療の可能性" 新潟医学会雑誌. (in press).