角膜上皮に特異的に発現する未知遺伝子の単離に関する研究

1996 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 08457467
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• Research Institution: Kyoto Prefectural University of Medicine
• Principal Investigator: 木下 茂 京都府立医科大学, 医学部, 教授 (30116024)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 大久保 公策 大阪大学, 細胞生体工学センター, 助教授 (40233069) ; 西田 幸二 京都府立医科大学, 医学部, 助手 (40244610)
• Keywords: 角膜上皮 / cDNA解析 / ヒト / cDNAライブラリー / 特異的な遺伝子 / ケラチン12

Research Abstract

我々はこれまでに,角膜上皮におけるcDNA解析プロジェクトを実施し,角膜上皮に特異的に発現している数種の未知の遺伝子の3'末端部分の塩基配列を決定した。本研究では,これらの遺伝子の全塩基配列の決定を行い,機能を類推した。
外科的処置の際に採取したヒト角膜上皮がpoly A+RNAを抽出し,cDNAを合成した。このcDNAにEcoRI linkerを接合し,λZAPIIベクターのアームに組み込んだ後,パッケージングを行い,cDNAライブラリーを作成した。つぎに,3'末端の塩基配列を含むクローンから作成したプローブを用いてcDNAライブラリーのスクリーニングを行い,陽性プラークを単離した。これらのプラークのインサート部分の塩基配列を決定し,コンピューターで連結させて,全塩基配列を決定した。
上記の角膜上皮に特異的な遺伝子のうち,これまでに3つの全塩基配列の決定に成功した。ひとつは498アミノ酸をコードしており,コピュータ-によるホモロジー検索では,マウスのケラチン12と79%,ウサギのケラチン12と85%の相同性を示していたことから,ヒトのケラチン12遺伝子であると考えられた。ケラチン12は角膜上皮に特異的な中間系線維であるとされており,今回初めてヒトのケラチン12遺伝子の塩基配列の決定に成功した。他の2つの遺伝子は,モチーフ検索により,ライソゾーム蛋白,膜蛋白と考えられた。前者においては,種々の組織でRT-PCR法でmRNAの発現の検討を再度行ったが,角膜上皮にのみ強いシグナルが得られた。

Research Products

• [Publications] Nishida K, et al.: "A gene expression profile of human corneal epithelium and the isolation of the human keratin 12 cDNA" Investigative Ophthalmology & Visual Science. 37 (9). 1800-1809 (1996)
• [Publications] Nishida K, et al.: "Apolipoprotein J expression in human ocular surface epithel ium" Investigative Ophthalmology & Visual Science. 37 (11). 2285-2292 (1996)