D-アミノ酸の高感度一斉分離分析法の確立とその哺乳類体内分布・動態に関する研究

1996 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 08457592
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• Research Institution: The University of Tokyo
• Principal Investigator: 今井 一洋 東京大学, 薬学部, 教授 (50012620)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 福島 健 東京大学, 薬学部, 助手 (00272485) ; 三田 智文 東京大学, 薬学部, 助手 (30187306) ; 本間 浩 東京大学, 薬学部, 助教授 (50190278)
• Keywords: D-アスパラギン酸 / マイクロダイアリシス / 松果体 / NBD-F / HPLCキラル固定相

Research Abstract

NBD-Fを用いてD,L-アミノ酸を標識化後、HPLCにて光学分離・検出する簡易高感度分離分析法により、ラット松果体にD-アスパラギン酸が高濃度に存在することを初めて明らかにした。本年度は、松果体内D-アスパラギン酸の役割解明を目指して、ラットの松果体のマイクロダイアリシスの手法を確立した。これにより松果体内液を経時的に採取し、この中のD-アスパラギン酸を、定量し、その日内変動を調べたところ、透析液中にD-アスパラギン酸が検出されないことが判明した。同時に測定したメラトニンが日内変動を示したことから、実験手技は確立できたことが判った。松果体細胞にはD-アスパラギン酸が漏れ出ないようにする機構が存在することが考えられた。
一方、約20種類にわたる全アミノ酸の光学対称体の一斉分離が不十分のため、NMRを用いてNBD-アミノ酸とキラル固定相との相互作用を明かにすべく実験を行った。NBD-アミノ酸とキラル固定相のキラル部位アミノ酸との相互作用が観察されたが、詳しい解析を行うためには更にデータが必要であり、現在検討中である。

Research Products

• [Publications] Matsunaga,H.et al.: "Boron Trifluoride-Etherate(Lewis Acid)as an Efficient Acid at Cyclization/Cleavage Reaction of D/L-Amino Acid Affording the Retention of their Original Configuration" Biomed.Chromatogr.10. 95-96 (1996)
• [Publications] Matsunaga,H.et al.: "A Major Factor for the Racemization and the Dehydration at the Cyclization/Cleavage Stage in the Edman Sequencing Method." Anal.Chem.68. 2850-2856 (1996)
• [Publications] Nakashima,K.& Imai,K.: "LC-CHEMILUMINESCENCE DETECTION" Methods in Chromatography. 1. 99-122 (1996)
• [Publications] Imai,K.et al.: "Analytical Chemistry and Biochemistry of D-Amino Acids" Biomed.Chromatogr.10. 303-312 (1996)
• [Publications] 今井一洋: "D-アミノ酸と疾患" ファルマシア. 32. 1214-1218 (1996)
• [Publications] Hamase,K.et al: "Regional distribution and postnatal changes of D-amino acids in rat brain" Biochim.Biophys.Acta. (印刷中). (1997)