1997 Fiscal Year Annual Research Report
脳内ステロイドホルモン分析法の開発と脳機能解明への応用
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08457594
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| Research Institution | Kanazawa University |
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Principal Investigator |
島田 和武 金沢大学, 薬学部, 教授 (90004605)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
三田村 邦子 金沢大学, 薬学部, 助手 (70242526)
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| Keywords | 脳 / ステロイドホルモン / オキソステロイド / 脂肪酸抱合体 / メチルオキシム / 定量法 / LC / MS |
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| Research Abstract |
昨年度の知見を基に,更にラット脳内におけるオキソステロイドの脂肪酸抱合体をLC/MSで検索した.その結果,先に確認されたpregnenolone3-stearateの他,pregnenolone 3-palmitate,dehydroepiandrosterone 3-stearte,-palmitate が新たに同定された.また,脳内における pregnenolone,dehydroepiandrostrone,pregnenolone 3-sulfateの存在もLC/MSなどにより改めて確認した.この際,これらオキソステロイドをmethyloxime誘導体へ導くことが,分子イオンピーク又は関連するピークの検出を容易とし,LC/MSでの同定上極めて有用なことも見出した.また,感度を比較したところ50倍程度の向上に繋がる場合もみられ,LC/MSにおける誘導体化の有用性を示唆する貴重な知見が得られた.
一方,ラット脳内脂肪酸抱合体(pregnenolone 3-stearate)のLC/MSによる定量法の開発を以下のようにして行った.すなわち,液/液抽出後,シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し,オキシム化後LC/MS(APCI)に付した.なお,オキシム化は試料の精製上も有用であった.定量法は精度,正確度に優れるものであり,実試料(灰白質)に適用したところ 100 ng/g tissue以上の存在が確認された.これは遊離型のそれを上まわるものであり,その生理的意義が注目される.
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[Publications] Kazutake SHIMADA: "Studies on neurosteroids V. Separation and characterization of pregnenolone 3-stearate in rat brains using high-performance liquid chromatography." J.Chromatogr.Sci.,. 35・2. 71-74 (1997)
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[Publications] Kazutake SHIMADA: "Studies on neurosteroids VI.Characterization of fatty acid esters of pregnenolone and dehydroepiandrosterone in rat brains using liquid chromatography-mass spectrometry." Anal.Commun.,. 34・5. 145-146 (1997)
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[Publications] 島田和武: "脳内ステロイドホルモンの分析" 薬誌,. 117・10〜11. 681-689 (1997)
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[Publications] Kazutake SHIMADA: "Studies on neurosteroids VII.Characterization of pregnenolone,its sulfate,and dehydroepiandrosterone in rat brains using liquid chromatography/mass spectrometry." J.Liq.Chromatogr.Relat.Techno.,. (in press).
