プロテオグリカン型プロテインチロシンホスファターゼζの脳形成における役割

1996 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 08458187
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• Research Institution: Okazaki National Research Institutes
• Principal Investigator: 野田 昌晴 岡崎国立共同研究機構, 基礎生物学研究所, 教授 (60172798)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 新谷 隆史 岡崎国立共同研究機構, 特別協力研究員 ; 前田 信明 岡崎国立共同研究機構, 助手 (90202308)
• Keywords: 6B4プロテオグリカン / PTPζ / プレイオトロフィン / ノックアウトマウス / チロシンホスファターゼ

Research Abstract

現在プロテオグリカンであると同定されている唯一の受容体型プロテインチロシンホスファターゼζ(RPTPζ)の脳形成における役割を明らかにするため、以下の研究を行った。
(1)PTPζリガンド分子の同定
6B4プロテオグリカンとPTPζは一つの遺伝子からRNA型スプライシングの違いによって生ずる。PTPζのリガンド分子を探す目的で、精製した6B4プロテオグリカンを用いてアフィニティー精製を行った結果、18-,28-及び40-kDaの3本のポリペプチドが回収された。この内18-kDa分子のN末のアミノ酸配列を決定したところ、プレイオトロフィンであることが明らかとなった。プレイオトロフィンによる大脳皮質神経細胞の神経突起伸展作用は抗6B4プロテオグリカン抗体で抑制されることから、プレイオトロフィンの受容体がPTPζであることが強く示唆された。
(2)ノックアウトマウスの作製
PTPζ遺伝子の第一axonにneo遺伝子を前向きに挿入したplasmidを構築し、これをES細胞に導入して相同組換え体を得た。次にこれらのES細胞株をマウス胚に導入後、子宮内に移植し、キメラマウスの作出に成功した。現在、引続いてキメラマウスを交配して、遺伝子変異が生殖系列にのったヘテロマウスの単離を試みている。

Research Products

• [Publications] Maeda,et al.: "6B4 proteoglycan/phosphacan,an extracellular variant of receptor-like protein-tyrosine phosphataseζ/RPTPβ,binds pleiotrophin/heparin-binding growth-associated molecule (HB-GAM)" The Journal of Biological Chemistry. 271・35. 21446-21452 (1996)