超音波画像誘導による生体回収ウシ卵子の発育能力と遺伝子発現に関する研究

1996 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 08556045
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research (A)
• Section: 試験
• Research Institution: Kyoto University
• Principal Investigator: 内海 恭三 京都大学, 農学部, 教授 (90033266)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 南 直治郎 京都大学, 農学部, 助手 (30212236) ; 細井 美彦 近畿大学, 生物理工学部, 講師 (70192739) ; 山田 雅保 京都大学, 農学部, 助教授 (10243073) ; 後藤 和文 鹿児島大学, 農学部, 助教授 (30162142) ; 鈴木 達行 山口大学, 農学部, 教授 (00216409)
• Keywords: 超音波画像 / 卵胞液吸引 / インヒビン / 遺伝子発現 / 体外培養 / RT-PCR法 / CCDイメージカメラ

Research Abstract

本研究では、超音波断層像によって生体内の卵巣卵子の動態を解析し、体外受精に利用する卵子の回収技術を体系化すると共に、これまでに問題とされている体外培養胚の移植後の発育異常(過大児)が高頻度に起こる原因を究明することを目的としている。ウシの過剰排卵処置時の卵胞動態を超音波画像診断装置により解析し、卵胞動態が採胚成績におよぼす影響を調べた。その結果、小卵胞数が少なく優勢卵胞が存在するウシ個体において、優勢卵胞の卵胞液を吸引除去することによって小卵胞の著しい発育が観察されること、および吸引除去後、2日目に従来からの過剰排卵処置を施すことによって安定した排卵誘起できることを明らかにした。またこの方法で採卵された胚のほとんどが移植可能と判定される良質のものであった。さらに卵胞液中のインヒビンが小卵胞の発育を抑制している可能性が考えられることから、次にインヒビンに対する抗体による卵胞液中のインヒビンを中和することを試みた。その結果、ブタインヒビンのC末端の27残基のアミノ酸から成るペプチドを抗原としてウシで調整された抗体を卵胞吸引の代わりにウシ個体に投与した結果、多数の小卵胞の発育が誘起され、さらに、過剰排卵処置によって多くの発育卵胞からの排卵が誘起されることを明らかにした。一方、体外培養胚の移植後の発育異常が起こる原因については全く明らかにされていないが、おそらく培養条件が体内での発生条件と大きく異なるために胚発生の調節にかかわる遺伝子発現に何らかの異常が生じるためであろうと推察されている。従って胚の遺伝子発現量を半定量的に測定する方法の開発を行った。その結果、CCDイメージカメラを用いた解析システムによって、体外培養胚の発現する微量なmRNAをRT-PCR法で半定量化出来るシステムを確立することができた。

Research Products

• [Publications] 小林修一: "ウシ発情周期における卵胞動態の超音波画像診断装置による解析と過剰排卵反応" 日本畜産学会報. 68・1. 45-53 (1997)
• [Publications] K.Utsumi: "Effect of passive immunization on growth of ollides and subsequent superovulatory response in Japanese Black Cattle." Theriogenology. (in press).