1997 Fiscal Year Annual Research Report
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08557064
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| Research Institution | Mie University |
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Principal Investigator |
鈴木 宏治 三重大学, 医学部, 教授 (70077808)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
本庄 栄二郎 日本製薬(株)研究開発本部, 東京研究部, 研究員
田辺 正孝 日本製薬(株)研究開発本部, 東京研究部, 主幹研究員
林 辰弥 三重大学, 医学部, 助手 (00242959)
武谷 浩之 三重大学, 医学部, 助手 (60222105)
井戸 正流 三重大学, 医学部, 講師 (90167263)
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| Keywords | プロテインS / 活性化プロテインC / C4b結合蛋白質(C4BP) / モノクローナル抗体 / 抗血栓薬 / 抗炎症薬 / ELISA / 血栓症 |
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| Research Abstract |
本研究では、抗血栓作用や抗炎症作用、線溶促進作用、細胞増殖作用、創傷治癒促進作用など多様な生物活性を有するプロテインS(PS)を、血栓症を始めとする多くの血管障害性疾患に対する治療薬として開発するための基礎研究を行うことを目的とする。そのため、(1)ヒト血漿から高純度のPSを大量に精製する方法の開発、(2)PSの抗原量および生物活性を正確に測定するシステムの開発、(3)PSのin vivoでの活性を評価する疾患モデル動物の開発、(4)PSの示す種々の生物活性の分子機構の解明の4項目について研究を行う予定である。
我々は昨年度、項目(1)について、効率的に高純度のPSを精製するため、PSの立体構造を認識するモノクローナル抗PS抗体を作製し、現在、引き続きこれらの抗体のPS分子上のエピトープを解析している。また、これらの抗体のうち、Ca^<2+>依存性に結合する抗体をBrCN-Sepharose 4Bに結合させた抗体カラムを作製し、ヒト血漿からPSを部分精製する方法を確立し、さらに、この部分精製PSをイオン交換樹脂HPLCを用いて純度98%以上に精製した。これによって、高純度PSの精製法をほぼ確立出来たと考える(主に、日本製薬グループが担当した)。本年度は、昨年度に引き続き、項目(2)について、申請者らが開発した遊離型PSとC4BP複合体型PSを分別定量するELISAを今回作製したモノクローナル抗体を用いてより特異性と感度の高いものに改良した(三重大学グループ担当)。また、項目(3)については、PSの生物活性評価法[APCコファクター活性測定法およびプロトロンビナーゼ阻害活性測定法]を改良するため、より親和性の高い抗PS抗体を用いたPS欠損血漿の作製、精製Xa因子、Va因子、プロトロンビンの調整を行った(三重大学グループ担当)。現在、PSの細胞増殖活性の分子機構を解明するため、PSの細胞膜受容体の単離を試みている。今後、in vivoでのPSの抗炎症活性、創傷治癒促進活性の測定法の開発を重点的課題として研究を行う。戴いた研究費の殆どは研究の遂行に必要な消耗品費等の購入に当てた。
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Research Products
(8 results)
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[Publications] Hayashi,T., Usui,T., Suzuki,K., et al.: "Regulation of the human protein C inhibitor gene expression in HepG2 cells:Role of Spl and AP2" Biochem,J.(in press). (1998)
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[Publications] Nishioka,J., Ma,N., Suzuki,K., et al.: "Protein C inhibitor secreted from activated platelets efficiently inhibits activated protein C on phosphatidylethanolamine of platelet membrane and microvesicles." J.Biol.Chem.(in press). (1998)
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[Publications] Usui,M., Hayashi,T., Suzuki,K., et al.: "Canine lipopolysaccharide-binding protein:_cDNA cloning and its tissue distribution of canine model of extended hepatectomy." Biochim.Biophys,Acta. (in press). (1998)
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[Publications] Deguchi,H., Takeya,H., Suzuki,K., et al.: "Dilazep an adenosine potentiator,inhibits tissue factor expression in the endothelial cells stimulated with tumor necrosis factor-α,thrombin or phorbol 12-myristate 13-acetate." Blood. 90. 2345-2356 (1997)
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[Publications] Takeya,H., Mori,T., Suzuki,K., et al.: "Anti-β2-glycoprotein I(β2GPI)monoclonal antibodies with lupus anticoagulant-like activity enhance the β2GPI binding to phospholipids." J.Clin.Invest.99. 2260-2268 (1997)
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[Publications] Deguchi,H., Takeya,H., Suzuki,K., et al.: "Kringle I domain of prothrombin interacts with factor Va during the assembly of the prothrombinase complex." Biochem,J.321. 729-735 (1997)
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[Publications] 鈴木宏治: "Annual Review 血液 1998" 中外医学社(高久 史麿 他編), 245(10) (1998)
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[Publications] 鈴木宏治: "DIC Ology" メジカルレビュー社(丸山 征郎 編), 490(7) (1997)
