1997 Fiscal Year Annual Research Report
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08557073
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| Research Institution | Osaka University |
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Principal Investigator |
宮川 周士 大阪大学, 医学部, 助手 (90273648)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
近藤 昭宏 宝酒造株式会社, バイオ研究所, 主任研究員
岡部 勝 大阪大学, 医学部, 助教授 (30089875)
白倉 良太 大阪大学, 医学部, 教授 (00116047)
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| Keywords | ブタ血管内皮 / GnT-III / 糖鎖 / tansfect / トランスジェニックマウス |
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| Research Abstract |
糖転移酵素α23ST(ST3GalIII)およびα12FTを発現するブタ血管内皮細胞の作成を試みた。遺伝子導入は発現ベクターpCAGGS(β-actin promoter)にc-DNAを挿入し、リピッド法によりブタ血管内皮細胞に導入した.
(1)抗原性の解析としてヒト正常血清(NHS)の細胞表面との反応性をFACSで解析した.タンパク糖鎖の変化は(2)ウエスタン及びレクチンブロット法にて解析した.(細胞より抽出した糖タンパク質3μgをSDS-PAGEで電気泳動し,IB-4及びNHSを用いて解析した.)また,細胞傷害性は(3)LDHアッセイ(細胞を20%,40%NHSと反応させ%cytotoxicityを測定した)にて解析した.
Transdfectantsは,ネオマイシンにより選択し,4つのα23ST高発現クローンを樹立した。同様にα1,2FT Transfectantsも2つの高発現クローンを樹立した.
抗原性ではα23ST transfectantsはparental SECに比しNHSで65-80%,IB-4レクチンで55-80%の抗原性の低下を示した.一方,α1,2FT TransfectantsはNHSで40-50%,IB-4レクチンで55-65%抗原性が低下した.ウエスタン及びレクチンブロット法では,α23ST,α1,2FT Transfectants両者ともに66KDa以下の糖タンパク質について,NHS,IB-4両者に対する反応性が著明に減少した.また,ブタ血管内皮に対する細胞傷害性では23ST Transfectantsでは,60〜80%,α1,2FT Transfectantsでは70% cytotoxicityを抑制した。
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[Publications] M.Tanemura et al.: "Suppression of The Xenoautigen galα(1,3)gal by N-Acetylglucosaminyl Transferase (GnT-III) in Transgenic mice" Transplantation Proceedings. 29. 895-896 (1977)
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[Publications] M.Tanemura et al.: "Reduction of The Major Swine Xenoantigen GALα(1,3)GAL by Transfection of N-Acetylglucosaminyl Transferase III(GnT-III) gene" Transplantation Proceedings. 29. 891-892 (1977)
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[Publications] Masahiro Tanemura et al.: "Significaut Downsgulation of the Major Swin Xenogntiger by N-Acetylglucosaminyl transferase III gene Transfection" Biochem.Biophy.Research.Commun.235. 359-364 (1977)
