1997 Fiscal Year Annual Research Report

遺伝子発現スイッチ機構を持つ遺伝子治療用ベクターの開発

Research Project

Project/Area Number	08557142
Research Institution	The University of Tokyo
Principal Investigator	斎藤泉東京大学, 医科学研究所, 助教授 (70158913)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	榊利之京都大学, 農学部, 助教授 (70293909)
Keywords	肝癌 / 遺伝子治療 / ベクター / アデノウイルス / AFPプロモーター
Research Abstract	播種性および転移性肝癌の特異的遺伝子治療をめざしたアデノウイルスベクターの開発を行った。まず部位特異的組換え醗酵Creを肝癌特異的に発現させる「制御ウイルス」を作製した。このウイルスは肝細胞特異的に働くα-フェトプロテイン(AFP)プロモーターの支配下に、核移行シグナルを付加したCre遺伝子を発現するアデノウイスルである。次にCre酵素により、強力なCAGプロモーターから目的遺伝子(今回はLacZ遺伝子)を発現する「発現標的ウイルス」を作製した。このウイルスは、CAGプロモーター下流のLacZ遺伝子との間にポリA付加シグナルを含むスタッファー配列を介在させてある。このスタッファー配列の両側にあるCre認識配列(lox配列)によりCre存在下ではスタッファーが除去され、CAGプロモーターからの強力な発現がオンになる。この二種類のウイルスを同時に肝癌由来HepG2細胞へ感染させると、AFPプロモーターから直接発現させた場合に比較して、約50倍の発現増強がみられた。この際非癌細胞株では発現がほとんどみられず、プロモーターの特異性は保たれていた。またヌードマウスにヒト由来肝癌細胞HuH7を接種し、播種性肝癌モデルを作製して二重感染法によりウイルスを経静脈的に播種すると、播種性肝癌細胞の10-15%に特異的なLacZ遺伝子の発現を認め、正常肝細胞では全く発現を認めなかった。アデノウイルスベクターをマウスに投与する時静脈注入法を用いると、その発現はほとんど肝細胞に特異的に起こることから、本法は全身的あるいは臓器全体への投与により、播種性および転移性肝癌の将来の遺伝子治療法となる可能性を持っていると考えられた。

Research Products
(5 results)

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All Publications (5 results)

[Publications] Kobayashi,M.et al.: "Expression a consitutively active phosphatidylinositol 3-kinase induces process formation in rat PC12 cells. Use of Cre/loxP recombination system." J.BIol.Chem.272. 16089-16092 (1997)
[Publications] Shibata,H.et al.: "Repid colorectal adenoma fromation initiated by conditional targeting of the Apc gene." Science. 278. 120-123 (1997)
[Publications] Arai,T.et al.: "A new system for stringent,high-titer VSV-G pseudotyped retrovirus bector induction by introduction of Cre recombinase into stable "pre-packaging" cell lines." J.Virol.72. 1115-1121 (1998)
[Publications] Sato,Y.et al.: "Enhanced and specific gene expression via tissue-specific production of Cre recombinase using adenovirus vector." Biochem.Bioph.Res.Co.(in press). (1998)
[Publications] Wakita,T.et al.: "Efficient conditional transgene expression in heparitis C virus cDNA transgenic mice mediated by the Cre/loxP system." J.Biol.Chem.(in press). (1998)

1997 Fiscal Year Annual Research Report

遺伝子発現スイッチ機構を持つ遺伝子治療用ベクターの開発

Principal Investigator

斎藤 泉 東京大学, 医科学研究所, 助教授 (70158913)

Research Products

[Publications] Kobayashi,M.et al.: "Expression a consitutively active phosphatidylinositol 3-kinase induces process formation in rat PC12 cells. Use of Cre/loxP recombination system." J.BIol.Chem.272. 16089-16092 (1997)

[Publications] Shibata,H.et al.: "Repid colorectal adenoma fromation initiated by conditional targeting of the Apc gene." Science. 278. 120-123 (1997)

[Publications] Arai,T.et al.: "A new system for stringent,high-titer VSV-G pseudotyped retrovirus bector induction by introduction of Cre recombinase into stable "pre-packaging" cell lines." J.Virol.72. 1115-1121 (1998)

[Publications] Sato,Y.et al.: "Enhanced and specific gene expression via tissue-specific production of Cre recombinase using adenovirus vector." Biochem.Bioph.Res.Co.(in press). (1998)

[Publications] Wakita,T.et al.: "Efficient conditional transgene expression in heparitis C virus cDNA transgenic mice mediated by the Cre/loxP system." J.Biol.Chem.(in press). (1998)

斎藤泉東京大学, 医科学研究所, 助教授 (70158913)