1998 Fiscal Year Annual Research Report
発生工学的手法を用いたマウス肝炎ウイルス抵抗性マウスの作出
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08558089
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| Research Institution | Institute of Neuroscience, NCNP |
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Principal Investigator |
田口 文広 国立精神・神経センター, 神経研究所, 室長 (30107429)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
伊藤 豊志雄 (財)実験動物中央研究所, 室長 (20106644)
山田 靖子 国立予防衛生研究所, 動物管理, 主任研究官 (20158223)
八神 健一 筑波大学, 実験動物センター, 教授 (40166476)
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| Keywords | mouse hepatitis virus(MHV) / MHY susceptibility / MHY receptor(MHVR) / gene replacement / gene targeting |
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| Research Abstract |
本年度は、抵抗性マウス由来のMHVリセプター(MHVR)MHVR2を、感受性マウスのMHVR1と置き換えたマウスを作成するためのベクターを作製した。MHVRは4個の細胞外ドメインをもつImmunoglobulin superfamilyに属する膜蛋白である。N末端のNドメインがウイルス結合領域であり、この領域のアミノ酸配列が、MHVR1、MHVR2の間で大きく異なっている。我々は、感受性マウスのMHVR1NドメインをMHVR2由来のものと置き換えるため、Nドメインから上流2.3kbを5'側の相同領域とし、3'側7kbの相同領域との間に、陽的選択のためのネオマイシン抵抗性遺伝子(neo)を、更に後に行う陰的選択のために、チミジンキナーゼ遺伝子(TK)を挿入し、これらの二つの遺伝子の両端にloxP配列を持つ遺伝子置換用ベクターを構築した。このベクターをES細胞に導入し、G418存在下で培養することにより、相同組み換え体を選択する。次にloxP配列を認識するCre Enzymeにより、neo,TK遺伝子を削除し、FIAU存在下で培養することにより、R2由来のウイルス結合領域を持ったES細胞を得る予定である。現段階では、遺伝子置換用のベクターが完成し、今後このベクターを用いて遺伝子置換したES細胞、さらに遺伝子置換したマウスを作成する計画である。このES細胞を用いて作成されるマウスは、MHV感受性マウスのMHVR1のみが抵抗性型MHVR2に変換しているので、この遺伝子置き換えマウスのMHV感受性を調べることにより、MVHRがマウスのMHV感受性を支配する単一遺伝子であるか否かが明らかにされる。
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Research Products
(6 results)
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[Publications] Taguchi,F.: "Biological functions of mouse hepatitis virus(MHV)spike(S)protein and implication of S protein-MHV receptor interaction in virus virulence." Curr.Topics Virol.1(in press). (1999)
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[Publications] Saeki,K.,Ohtsuka,N.,and Taguchi,F.: "Isolation and characteriza tion of murine coronavirus mutants resistant to neutralization with soluble receptors." Adv.Exp.Med.Biol.440. 11-16 (1998)
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[Publications] Ohtsuka,N.,Saeki,K.,Yamada,Y.K.,and Taguchi,F.: "Differential receptor-functionality of the two distinct receptor protein for mouse hepatitis virus" Adv.Exp.Med.Biol.440. 77-80 (1998)
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[Publications] Yamada,Y.K.,Takimoto,T.,Yabe,M.,and Taguchi,F.: "Requirement of proteolytic cleavage of the murine coronavirus MHV-2 spike protein for fusion activity." Adv.Exp.Med.Biol.440. 89-93 (1998)
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[Publications] Ueno,Y.,Iwama,M.,Iho,T Yagami,K.et al.: "Prevalence of "orphan"parvoirus infections in mice and rats." Exp.Anim.47. 207-210 (1998)
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[Publications] Ohshima,T.,Iwama,M.,Uno,Y.,Yagami,K.,et al.: "Induction of apoptosis in vitro and in vivo by H-1 parvovirus infection." J.gne.Virol.79. 3067-3071 (1998)
