潜伏関連転写物を指標としたマレック病ウイルス潜伏感染細胞のin situ解析

1997 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 08660354
• Research Institution: HOKKAIDO UNIVERSITY
• Principal Investigator: 遠藤 大二 北海道大学, 大学院・獣医学研究科, 助手 (40168828)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 昆 泰寛 北海道大学, 大学院・獣医学研究科, 助教授 (10178402)
• Keywords: マレック病ウイルス / 潜伏感染 / in situハイブリダイゼーション / ジゴキシゲニン標識プローブ / RT-PCR / ハイブリッド組織化学 / 潜伏感染関連転写物 / MDV腫瘍株化細胞

Research Abstract

本研究は、MDV潜伏感染細胞内において発現するウイルス遺伝子の解析を目的とする。本年度においては、MDV潜伏感染が共通して発現している潜伏感染関連転写物を同定し、潜伏感染細胞のin situ解析の基本となるプローブを作出した。MDV潜伏感染のモデルとしては、マレック病ウイルス(MDV)形質転換株化細胞(MDV株価細胞)が知られているが、独立に樹立された株間では転写物が異なることが知られてきた。MDV株価細胞間の転写物の相違は、細胞中に存在する偶発的に活性化したMDVの転写物の影響による事が予測されるため、申請者らは偶発的活性化細胞を含まない細胞集団についての転写解析を行った。まず、主要初期抗原pp38の発現細胞の割合から、10^3個のMDV形質転換株化細胞には偶発的活性化MDVが含まれないことを示した。続けて、10^3個のMDV株化細胞についてRT-PCR-サザンブロット解析を行い、ICP27、pol、US3、A41、gA、gB、TK、pp38及びUL50はいずれも潜伏感染細胞中では発現しないことを示した。それに対し、ICP4の塩基配列に対応する0.7kbpのRT-PCR産物は、RPL-1,HPRS-1,MOGA-1,MOGA-2,MSB-1およびMTB-1の6種のMDV株価細胞で共通して検出して検出された(遠藤)。0.7kbpのRT-PCR産物に対応する転写物は、産物のサイズおよび塩基配列からスプライシングを受けていることが示唆された。これらの結果から、ICP4の塩基配列に対応する転写物は、潜伏感染状態のMDV形質転換株化細胞で共通して発現されることが示唆された。続けて、0.7kbpのRT-PCR産物をベクターにクローニングし、潜伏感染を共通して検出することのできるプローブを作出した(昆)。

Research Products

• [Publications] Endoh,D.: "Detection of transcripts of Marek's disease virus serotype 1 ICP4 homologue (MDV1 ICP4) by in situ hybridization." Journal of Veterinary Medical Science. 58・10. 969-975 (1996)
• [Publications] Kon,Y.: "Detection of coagulating gland renin by hybridohistochemistry." Anatomy Histology and Embryology. 25. 289-294 (1996)
• [Publications] Cho,K.-O.: "Significance of Marek's disease virus serotype 1-specific phosphorylated proteins in the Marek's disease skin lesions." Avian Pathology. 26. 707-720 (1997)
• [Publications] Kon,Y.: "Expression of renin in the rat liver." Anatomy Histology and Embryology. (印刷中). (1998)
• [Publications] Endoh,D.: "Retroviral sequence inserted into Md5 strain of Marek's disease virus type 1." Journal of Veterinary Medical Science. 60・2. 227-235 (1998)