1997 Fiscal Year Annual Research Report

植物中のグリオキシル酸の前駆体の検索-高蓚酸尿症における蓚酸生成抑制の試み

Research Project

Project/Area Number	08670168
Research Institution	Hamamatsu University School of Medicine
Principal Investigator	市山新浜松医科大学, 医学部, 教授 (90025601)
Keywords	グリコール酸 / 蓚酸 / グリオキシル酸 / 原発性高蓚酸尿症 / グリコール酸オキシダーゼ / グリコール酸定量 / 1,5-ジフェニルフォルマザン / グリオキシル酸・トリス付加物
Research Abstract	動物では蓚酸は主として肝臓においてグリコール酸から供給されるグルオキシル酸を前駆物質として生産されるが,グリコール酸の由来は不明である。グリコール酸は光呼吸の中間体であり,植物に多く含まれると推定される。ヒトにおける蓚酸生成への植物性食物由来のグリコール酸の関与の検討を目的として本研究を開始した。まず,簡便で精度の高いグリコール酸定量法の開発を目指し,昨年度はグリコール酸からグリコール酸オキシダーゼ(GO)の作用で生じるグリオキシル酸をチアゾリジン-2-カルボン酸に変えてからpicotagクロマトグラフィーで測定する方法を検討した。満足すべき精度,特異性は得られたが,手間と特に費用がかかるという欠点があった。そこで,本年度もグリコール酸定量法の開発を続行し,GOの作用によりグリコール酸から生じるグリオキシル酸をフェニルヒドラゾンとした後,K_3Fe(CN)_6による酸化で1,5-ジフェニルフォルマザンとして定量する方法を検討した。グリオキシル酸もGOの基質になるという欠点は,Tris緩衝液(pH8.3)を用いて反応を行い,グリオキシル酸をTrisとの付加物として補捉することで回避した。同じくGOの作用で乳酸から生じるピルビン酸はグルタミン酸:ピルビン酸トランスアミナーゼ(GPT)-グルタミン酸デヒドロゲナーゼ(GIDH)-G6Pデヒドロゲナーゼ(G6PDH)系により除去した。幸い,Tris-グリオキシル酸付加物は用いた条件ではGO,GPTの作用を受けなかった。1,5-ジフェニルフォルマザンは515nmに強い吸収を持ち(εmM=40),且つ基質特異性が明らかなGOを用いているため,今回開発した方法を用いると1nmolという高い感度でもってグリコール酸の特異的な定量が可能であった。現在,蓚酸生成への植物性食物由来のグリコール酸の関与の検討に取りかかっている。

Research Products
(6 results)

All Other

All Publications (6 results)

[Publications] Ishikawa,K.: "Pyridoxal 5'-phosphate binding of a recombinant rat serine:pyruvate/alanine:glyoxylate aminotransferase" J.Biochem.119・5. 970-978 (1996)
[Publications] Suzuki,T.: "Energy-dependent degradation of a mutant serine:pyruvate/alanine:glyoxylate aminotransferase in a primary hy peroxaluria type 1 case" Intracellular Protein Catabolism (Advances in Experimental Medicine and Biology,vol.389,eds.Suzuki,K.& Bond,J.S.). 137-140 (1996)
[Publications] Terada,K.: "The reqirement of heat shock cognate 70 protein for mitochondrial import varies among precursor proteins and depends on precarsor length" Mol.Cell.Biol.16・11. 6103-6109 (1996)
[Publications] Naito,Y.: "Morphological analysis of remal cell culture models of calcium phosphate stone formation" Urol.Res.25・1. 59-65 (1997)
[Publications] Oda,T.: "Induction by peroxisome proliferatots and friiodothyronine of serine:pyruvate/alanine:glyoxylate aminotlansferase of rat liver" FEBS Lett.418・3. 265-268 (1997)
[Publications] 市山新: "原発性高蓚酸尿症" Annual Review腎臓1996(長沢俊彦,河辺秀月,伊藤克己,浅野泰,遠藤仁編). 232-238 (1996)

1997 Fiscal Year Annual Research Report

植物中のグリオキシル酸の前駆体の検索-高蓚酸尿症における蓚酸生成抑制の試み

Principal Investigator

市山 新 浜松医科大学, 医学部, 教授 (90025601)

Research Products

[Publications] Ishikawa,K.: "Pyridoxal 5'-phosphate binding of a recombinant rat serine:pyruvate/alanine:glyoxylate aminotransferase" J.Biochem.119・5. 970-978 (1996)

[Publications] Suzuki,T.: "Energy-dependent degradation of a mutant serine:pyruvate/alanine:glyoxylate aminotransferase in a primary hy peroxaluria type 1 case" Intracellular Protein Catabolism (Advances in Experimental Medicine and Biology,vol.389,eds.Suzuki,K.& Bond,J.S.). 137-140 (1996)

[Publications] Terada,K.: "The reqirement of heat shock cognate 70 protein for mitochondrial import varies among precursor proteins and depends on precarsor length" Mol.Cell.Biol.16・11. 6103-6109 (1996)

[Publications] Naito,Y.: "Morphological analysis of remal cell culture models of calcium phosphate stone formation" Urol.Res.25・1. 59-65 (1997)

[Publications] Oda,T.: "Induction by peroxisome proliferatots and friiodothyronine of serine:pyruvate/alanine:glyoxylate aminotlansferase of rat liver" FEBS Lett.418・3. 265-268 (1997)

[Publications] 市山 新: "原発性高蓚酸尿症" Annual Review腎臓1996(長沢俊彦,河辺秀月,伊藤克己,浅野泰,遠藤仁 編). 232-238 (1996)

市山新浜松医科大学, 医学部, 教授 (90025601)

[Publications] 市山新: "原発性高蓚酸尿症" Annual Review腎臓1996(長沢俊彦,河辺秀月,伊藤克己,浅野泰,遠藤仁編). 232-238 (1996)