1997 Fiscal Year Annual Research Report
癌特異的糖鎖抗原の合成酵素遺伝子プロモーターを用いた遺伝子治療
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08670181
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| Research Institution | Nagoya University |
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Principal Investigator |
古川 圭子 名古屋大学, 医学部, 助手 (50260732)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
古川 鋼一 名古屋大学, 医学部, 教授 (80211530)
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| Keywords | 糖鎖抗原 / 遺伝子治療 / 糖鎖合成酵素遺伝子 / レトロウィルスベクター |
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| Research Abstract |
1)転写調節領域の解析
ヒトGM2/GD2合成酵素(β1,4-N-acetylgalactosaminyltransferase)ゲノム遺伝子を単離した。次に、転写開始点a、b、cより始まるエキソン1a、1b、1cの5´上流域の転写活性を検討した結果、エキソン1a及び1bの上流域にイントロン1を加えると転写活性は著しく上昇し、この活性の細胞特異性は本酵素遺伝子発現と相関していた。
2)GM2/GD2合成酵素遺伝子プロモーターを連結した殺細胞遺伝子発現ベクターによる殺細胞効果の特異性の検討。
GM2-GD2合成酵素遺伝子のプロモーター/エンハンサー領域(エキソン1bの上流からインロトン1領域まで)と殺細胞遺伝子(単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ(HSV-TK)遺伝子)を連結したレトロウイルス発現ベクターを作製した。これを、本酵素遺伝子の高発現細胞株(AS:アストロサイトーマ)に導入し、stable transfectantを樹立した。細胞培養溶液にガンシクロビル(GCV)を添加し細胞増殖抑制効果を検討した結果、親株ではGCV:5x10^<-4>Mにおいても、増殖抑制が認められないが、stabletransfectantにおいては、GCV:5x10^<-6>Mで70%以上の増殖抑制が認められた。同様に、本酵素遺伝子の低発現細胞株MeWoに上記のレトロウイルスベクターを導入したstable transfectantでは、GCV添加による増殖抑制がほとんど認められなかった。更に、HSV-TK cDNAをプローブとした各種stable transfectantのSouthern blotを行い、同一コピー数のTK遺伝子が導入されたASおよびMeWoを選出してGCVに対する感受性を比較検討した。この場合においても、TK遺伝子導入ASにおいてGCVによる増殖抑制が認められたが、TK遺伝子導入MeWoでは、ほとんど抑制が認められなかった。
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[Publications] Fukumoto Satoshi: "Genetic remodeling of gangliosides resulted in the enhanced reactions to the foreign substances in skin." Glycobiology. 7. 1111-1120 (1997)
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[Publications] Miyazaki Hiroshi: "Expression cloning of rat cDNA of UDP-galactose:GD2 β1,3-galactosyltransferase that determines the expression of GD1b/GM1/GA1." J.Biol.Chem.272. 24794-24799 (1997)
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[Publications] Takamiya Kogo: "Mice with disrupted GM2/GD2 synthase gene lack complex gangliosides,but exhibit only subtle defects in their nervous system." Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 93. 10662-10667 (1996)
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[Publications] Furukawa Keiko: "Genomic organization and chromosomal assignment of the human β1,4-N-acetylgalactosaminyltransferase gene:Identification of multiple transcription units." J.Biol.Chem.271. 20836-20844 (1996)
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[Publications] Yamamoto Akihito: "Heterogeneity in the expression pattern of two ganglioside synthase genes duringmouse brain development." J.Neurochem.66. 26-34 (1996)
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[Publications] Okada Masahiko: "High expression of ganglioside GD3 synthase gene in adult T cell leukemia cells unrelated to the gene expression of human T lymphotropic virus type I." Cancer Res.56. 2844-2848 (1996)
