クローナル検索に基づいた単離アベラントクリプトの増殖形態と遺伝子変異

1996 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 08670270
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• Research Institution: Aichi Cancer Center Research Institute
• Principal Investigator: 立松 正衞 愛知県がんセンター, 病理学第一部, 部長 (70117836)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 中西 速夫 愛知県がんセンター, 病理学第一部, 室長 (20207830) ; 稲田 健一 愛知県がんセンター, 病理学第一部, 主任研究員 (70246081)
• Keywords: 1,2-dimethylhydrazine(DMH) / キメラマウス / ラット / Aberrant crypt foci(ACF) / C3H系統特異抗体 / 腺管分離 / 大腸発癌 / 単クローン増殖

Research Abstract

1.Aberrant crypt foci(ACF)の選別・分離・観察ならびに分子生物学的検索法
マイクロインジェクション装置により墨汁を正常大腸陰窩ならびにACFの陰窩に注入すると、たとえあふれても隣接陰窩表面に残るのみで、陰窩内には入らず、墨汁注入陰窩のみを正確にマ-キングの可能なことを示した。腺管分離はBjerknes and Cheng法の変法に基づいた30mMEDTAを含むHanks'培養液で10分3回の処理で良い結果が得られた。分離した腺管ならびにACFは、固定後、30分間蒸留水で水洗することで走査電顕的観察に適することが明らかとなった。マイクロサテライトマーカーによる解析では、C3Hより単離した腺管からDNAを抽出し、Y染色体特異的(Sry)マーカーおよびマイクロサテライトマーカー(D8Mit4,Research Genetics,Inc.,Huntsville,AL)を用いPCR法により系統および性の判定を行った結果、一個の腺管からでも判別可能な条件設定ができた。
2.正常大腸ならびにACFの発育形態
生後5、10、15日の正常ラット大腸陰窩を腺管分離により観察した結果、腺底部が二分割するfission mechanismにより腺管数を増やし、増殖が盛んな時は、3ならびに4分岐腺管が存在する事を示した。一方、DMH誘発ACFも腺管底部が二分割するfission mechanismにより増殖することが、一腺管あたり二分岐までで、複数の腺管より構成されるACFは非分岐腺管と二分岐腺管より構成されることが明らかとなった。
以上の結果、本年度の目標であるACFのクロナリテイーの検索法の確立は,達成されたと考えられる。

Research Products

• [Publications] Fujimitsu,Y.,et al.: "Development of Aberrant Crypt Foci Involves a Fission Mechanism as Revealed by Isolation of Aberrant Crypts." Jpn.J.Cancer Res.87. 1199-1203 (1996)
• [Publications] Tatematsu,M.,et al.: "Primary monoclonal and secondary polyclonal growth of colon neoplastic lesions in C3H/HeN【tautomer】BALB/c chimeric mice treated with 1,2-Dimethylhidrazine : immunohistochemical detection of C3H strain-specific antigen and simple sequence length polymorphism analysis of DNA." Int.J.Cancer. 66. 234-238 (1996)
• [Publications] 立松正衞等: "胃・大腸癌の単クローン増殖と細胞分化" 消化器癌. 6(1). 31-35 (1996)
• [Publications] Tatematsu,M.,et al.: "Recent Advances in Gastroenterological Carcinogenesis" Monduzzi Editore (Bologna-Italy), 7 (1996)