1997 Fiscal Year Annual Research Report
| Project/Area Number |
08670310
|
|---|
| Research Institution | Sapporo Medical University |
|---|
Principal Investigator |
藤井 暢弘 札幌医科大学, 医学部, 教授 (90133719)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
木村 浩一 札幌医科大学, 医学部, 講師 (90177915)
横沢 紀子 札幌医科大学, 医学部, 講師 (50167722)
|
|---|
| Keywords | ボツリヌス毒素 / SNAP-25 / Syntaxin / NG108 / SK-N-F1 |
|---|
| Research Abstract |
C型,E型毒素による培養細胞でのSNAP-25あるいはsyntaxinの分解
我々はC型毒素が培養神経細胞NG108に高親和性の結合ををすることを明らかにした。
この結合による毒素の細胞内取り込みを検討するために,培養液に加えた毒素がNG108細胞内の標的syntaxinを分解するかどうかを調べた。0.5から50nMのC型毒素で48から96時間処理した場合に分解が認められた。96時間後のED50は1.5nMであった。50nM毒素によるsyntaxinの切断はクロロキンによって促進され,サイクロヘキシミドやNH4Clによって阻害された。50nMの濃度ではクラスリン被覆小胞によるエンドサイトーシスとは異なる経路で細胞内に取り込まれる可能性が示唆された。
また,毒素の細胞への結合を阻害するモノクローナル抗体はsyntaxinの分解を阻害した。C型毒素は低温でNG108細胞に結合し,低温で結合した毒素は抗毒素抗体によって中和されるsyntaxinを分解できなかった。
E型毒素については,毒素の結合性を示す細胞実験系が存在しなかったことからC型毒素のような試みは行われていなかった。しかし,我々はSK-N-F1細胞がE型毒素を結合することを見いだし,毒素の結合とSNAP-25の切断実験を試みた。トリプシン処理をしたE型毒素はintactSK-N-F1細胞のSNAP-25を切断したが,未処理の毒素には切断活性が認められなかった。
|
Research Products
(9 results)
-
[Publications] Toru Kubota: "Mosaic type of the nontoxic-nonhemaggululutinin Component genc in clostridium bctulinum type A straln isolatated from infant botulism in Japan" Biochem.Biophys.Res.Commun.224(3). 843-848 (1996)
-
[Publications] Kohji Moriishi: "Molecular cloning of the gene encoding the mosaic neuntcxin,composed parts of botulinum neurotoxin types cl and D,and PCR detection of this gene from〜" Appl.Environ.Microbiol.62(2). 662-667 (1996)
-
[Publications] Kohji Moriishi: "Mosaic structures of neurotoxins produced from clostridiun botulinum types C and D organisms" Biochim.Biophys.Acta. 1307. 123-126 (1996)
-
[Publications] Yoko Miyashita: "Light-sensitive response in Melanophores of Xenopus laevis:II rho is involved in eight-induced melanim aggregation" J.Exp.Zool.276. 125-131 (1996)
-
[Publications] Toru Kubota: "Epltope regions in the heary chain of Clostridium botulinum type E neurotoxin recognized by monoclonal antibodies." Appl.Environ.Microbiol.63(4). 1214-1218 (1997)
-
[Publications] Toru Kubota: "Gene arrangement in the upstream region of clostridium botulinum type E and clostridium butyricum BL6340 progenitor toxin gunes is〜" FEMS Microbiol.Lett.158. 215-221 (1998)
-
[Publications] 三高 俊広: "肝臓の多機能性幹細胞" Molecular Medicine. 34(5). 554-565 (1997)
-
[Publications] 水口 徹: "スーパー肝細胞" Surgery Frontier. 1. 61-65 (1997)
-
[Publications] Takashi Kojima et al.: "Effects of melatonin on proliferation,oxidative stress and Cx32 gap junction protein expression in primary cultures of" Cell Structure and Function. 22. 347-356 (1997)
