1998 Fiscal Year Annual Research Report
カナマイシン耐性結核菌の遺伝子変異の検出と迅速検出法の開発
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08670470
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| Research Institution | Osaka Prefectural Institute of Public Health |
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Principal Investigator |
勝川 千尋 大阪府立公衆衛生研究所, 公衆衛生部, 主任研究員 (20183725)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
田丸 亜貴 大阪府立公衆衛生研究所, 公衆衛生部, 研究員 (70270767)
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| Keywords | 結核菌 / カナマイシン / 耐性 / rrs遺伝子 / PCR-RFLP analysis |
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| Research Abstract |
カナマイシン耐性菌の16S rRNA遺伝子(γγs遺伝子)変異の迅速検出法の開発。
カナマイシン耐性結核菌43株のうち29株(67.4%)にγγs遺伝子の塩基置換が認められ、カナマイシン耐性の形質発現に関与していることが示唆された。この変異はposition1400:A→G26株、position1401:C→T1株、position1401:C→A+position1483:G→T2株であり、これらの変異を迅速に検出するための検出法の開発を行った。
1、 γγs遺伝子の1250番目からinterveningsequence(ΓΓS)の38番目までの領域(300bp)の塩基配列の解析により、感受性株では1397〜1401にTsp45、1400〜1403にTaiIの制限酵素切断配列があるが、position1400:A→Gの変異株ではTsp45IおよびTaiIの切断配列が消失し、代わりに1399〜1402BsttUIの切断配列が現れ、position1401:C→Tおよびposition1401:C→Aの変異株ではTsp45IおよびTaiの切断配列が消失していた。またposition1483:G→Tの変異株では1482〜1486にDdeIの切断配列が現れていた。
2、 PCR-RELP法(Polymerase Chain Reaction-Restriction Fragment Length Polymorphisism)よる遺伝子変異の検出:1の結果より、γγs遺伝子の1250番目からΓΓSの38番目の塩基までの領域(3)Opp)をPCRで増幅し、その増幅産物を4種の制限酵素Tsp45I、Tai、BstUIおよびDdelでそれぞれ切断し、切断されたフラグメントの長さの違いを電気泳動により確認することによって、γγs遺伝子の変異の有無および変異の位置の推測が行え、カナマイシン耐性菌の迅速検出が行えることが証明できた。
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[Publications] Yasuhiko Suzuki: "Detection of kanamycin-resistant Mycobacterium tuberculosis identifying mutations in the 16S rRNA gene" Journal of Clinical Microbiology. 36. 1220-1225 (1998)
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[Publications] Chihiro Katsukawa: "A comprebensive report of the state of tuberculosis in Japan" Journal of Antibacterial and Antifungal Agents. 27. 315-335 (1999)
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[Publications] Yasuhiko Suzuki: "Immunological characterization of five recombinant Mycobacterium leprae proteins produced in Escherichia coli" Proceeding of 33rd US-Japan Tuberculosis and Leprosy Symposium. 33. 58-61 (1998)
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[Publications] Aki Tamaru: "Detection of mulations on the genome of drug resistant clinical isolates of Mycobacterium tuberculosis in Japan" Proceeding of 33rd US-Japan Tuberculosis and Leprosy Symposium. 33. 190-190 (1998)
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[Publications] 鈴木定彦: "結核菌の薬剤耐性検査 薬剤耐性に関与する遺伝子と迅速診断への応用の可能性" 臨床と微生物. 25. 795-801 (1998)
