特異的抗ケモカイン療法特に抗IL-8療法の開発と炎症性肺疾患治療への応用

1996 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 08670678
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• Research Institution: Keio University
• Principal Investigator: 藤島 清太郎 慶應義塾大学, 医学部, 助手 (00173419)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 中村 守男 慶應義塾大学, 医学部, 助手 (40245494)
• Keywords: インターロイキン8 / IL-8 / 再膨張性肺水腫 / ARDS / 抗IL-8抗体 / アンチセンスDNA

Research Abstract

2年間の実験計画の初年度として、平成8年度には既にクローニング済の抗ウサギIL-8モノクローナル抗体をハイブリドーマで大量に生産し、以下の実験に用いた。
ウサギを麻酔後に左側開胸し、左主気管支の結紮により左肺を無気肺にした。3日後に気管支の結紮を解き、胸腔ドレーンで持続的に陰圧をかけて肺を急激に再膨張させることで、安定した肺水腫モデルを作成し得た。病理学的には再膨張肺に好中球集積をともなう水腫像を認め、免疫組織染色では肺胞マクロファージを中心にIL-8の発現を認めた。次にこの実験モデルにおいて、上述の抗IL-8抗体の治療効果を検討した。抗IL-8抗体の前投与により、肺水腫の指標値である肺湿乾重量比、I-125標識アルブミン肺組織取り込み率の上昇は、ともに有意に抑制され、組織学的検討と合わせ、IL-8の肺水腫病態への関与が明らかとなった。一方対照体を投与された動物では、上記指標値の改善を認めなかった。
また抗体以外にも、IL-8に対するアンチセンス・SオリゴDNAを初年度は3種類設計し、DNA合成器により合成後、HPLCを用いて精製した。この合成DNAをエンドトキシンで刺激した単球系培養細胞MonoMac6の培養液に加え、IL-8の産生に対する作用をin vitroで検討した。培養上清中のIL-8をELISA法により定量したが、残念ながら今回合成したアンチセンスDNAはIL-8産生を有意に抑制しなかった。次年度はさらに別の配列のアンチセンス分子を設計・合成し、そのIL-8産生に対する作用をELISA法に加え、PCRを用いた遺伝子解析法にても検討予定である。

Research Products

• [Publications] 藤島清太郎: "Cell-associated IL-8 in human blood monocytes:Analysis by flow cytometry" Cytometry. 24・4. 382-389 (1996)
• [Publications] 藤島清太郎: "Seram-MIP-1α and IL-8 in septic patients" Intensive Care Medicine. 22・11. 1169-1175 (1996)
• [Publications] 藤島清太郎: "急性臓器不全とサイトカイン" 医薬の門. 32・2(予定のため不明). (1997)
• [Publications] 藤島清太郎: "SIRSと多臓器不全の病原因子としてのサイトカイン" Biomedical Perspectives. 不明(予定のため). (1997)