1996 Fiscal Year Annual Research Report
ジストロンフィンN端結合蛋白の正常筋線維超微局在とジストロフィンとの相互関係の検討
| Project/Area Number |
08670728
|
|---|
| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
|
| Research Institution | Showa University |
|---|
Principal Investigator |
若山 吉弘 昭和大学, 医学部, 教授 (40138467)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
渋谷 誠二 昭和大学, 医学部, 講師 (80167444)
|
|---|
| Keywords | dystrophin / N-terminus / aciculin / talin / calmodulin / β-spectrin / skeletal muscle / localization |
|---|
| Research Abstract |
DystrophinのN端近辺結合蛋白の候補としてactin,talin,calmodulin,aciculinなどがある。talin,calmodulin,aciculinに対する抗体やdystrophinのN端近くの桿状部(アミノ酸残基407-817)を認識する羊抗60kDa dystrophin抗体などを用いて平成8年度は金コロイド標識電顕法によりtalin,calmodulin,aciculinの正常筋線維内での超微局在と共にdystrophinとtalin,systrophinとcalmodulin,dystrophinとaciculinなどの2つのepitopeが近接しているかどうかを検討した。抗calmodulin抗体は市販のbovine brainから精製したもの(Upstate Biotechnology Incorporated社製)を抗原にウサギで作製した。抗aciculin抗体は(Belkin AM. et al.J Biol Chem 270:6328-6337, 1995)に基ずきその部分ペプチドCDKSFIGQQFAVGを合成しウサギに免疫して得た。また抗β-spectrin抗体はWilkelman N. et al. J Biol Chem 265:20449-20454, 1990によるmuscle specific isoformの部分ペプチドGKKDKEKRFSFFPKKKを合成しウサギと羊に免疫して得た。talinはChemicon社製のモノクローン抗体を、更にdystrophinはDr.Hoffmanより供与された羊抗60kDa抗体(認識部位上述)を用いた。正常マウス大腿四頭筋やヒト生検筋のうち組織化学的に正常なものを細切後異種動物で感作作製された一次抗体を単独又は適当な2種類の組合せを作り、適当に希釈し単独又は2種類混合して4℃24時間反応させた後よく洗浄した。2次抗体は5nm又は10nm金粒子標識したヤギ抗ウサギ、ロバ抗羊、ヤギ抗マウス抗体を1次抗体に従って20倍に希釈し4℃24時間反応させ、よく洗浄後後固定し、脱水後エポンに包埋、薄切切片を電顕にて観察した。talin,calmodulin,aciculinともdystrophinやβ-spectrinと同様に正常骨格筋細胞膜の裏打ち構造に随伴していた。またtalin,calmodulin,aciculinとdystrophinとの2重標識では2つのepitopeがしばしば接近に観察された。
|
Research Products
(1 results)
