1996 Fiscal Year Annual Research Report

抗酸化酵素の細胞内局在および分泌機構の解明と成長発達、小児疾患に伴う変動

Research Project

Project/Area Number	08670866
Research Category	Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
Research Institution	山梨医科大学
Principal Investigator	朝山光太郎山梨医科大学, 医学部, 講師 (70129310)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	小寺浩司山梨医科大学, 医学部, 医員
Keywords	抗酸化酵素 / フリーラジカル / 過酸化脂質 / 免疫組織化学 / 仏ノアッセイ / 小児 / 蛋白発現 / セレン
Research Abstract	ラットの細胞内GPXと血漿GPXについて、各々に対する特異的ポリクローナル抗体を用いて、ロケット免疫電気泳動法を行った。血漿GPXの血漿濃度はロケット法の至適測定濃度の範囲であったが、腎組織に貯蔵されている量は測定下限以下であった。細胞内GPXの臓器中濃度も、ロケット法の測定限界以下であることが確認できたので、イムノブロットを行い、感度の高いECL法で検出してデンシトメトリーで半定量することから始めることとした。細胞内GPXをCOS7細胞に一過性に発現させた実験では、細胞内局在を免疫金染色法で電顕的に明確に示すほど高い発現が得られなかったので、CMVプロモーターを有するpCI-neoベクターを用いてCHO細胞とT47D細胞に恒常的に発現させて検討中である。血漿GPXは腎尿細管上皮に多く含まれ、糖尿病ラットにおいては細胞内GPXとともに血漿GPXも腎組織では免疫組織化学染色で強染することがわかった。腎組織におけるmRNAの測定による蛋白発現のレベルと免疫酵素電顕的検討については現在進行中である。2つのGPXはセレノシステインを分子内酵素活性部位に有しており、DNA配列としては通常では停止コドンであるTGAの配列がこれに該当することが判明している。セレン欠乏症ではGPX活性は低下する。離乳後ラットをセレン欠乏食で飼育した後に、腎組織における2つのGPXの発現に関する検討を行った。血漿中と腎におけるGPX活性は欠乏食開始1週後から著明に低下していたが、mRNAレベルは両酵素とも活性値ほどは低下していなかった。イムノブロット法によるデンシトメトリーの成績をあわせて考慮すると、セレン欠乏によるGPX発現の調節は、転写、翻訳、翻訳後の3段階のいずれでも行われていることが示唆される。今年度はラットを用いた生体内におけるGPXの発現調節を主眼に、研究を推進したが、今後は培養細胞を用いたサイトカインや増殖因子と関連した調節機構も検討を予定している。

Research Products
(8 results)

All Other

All Publications (8 results)

[Publications] 朝山,光太郎: "Increased activity of plasma cholesteryl ester transfer protein in children with end-stage renal disease receiving continuous ambulatory peritonealdialysis." Nephron. 72. 231-236 (1996)
[Publications] 朝山,光太郎: "Immunohistochemical localization and quantitative analysis of cellular glutathione peroxidase in foetal and neonatal rat tissues : fluorescence microscopy image analysis." Histochemical Journal. 28. 63-71 (1996)
[Publications] 柴田,亮行: "Intense superoxide dismutase-1 immunoreactivity in intracytoplasmic hyaline inclusions of familial amyotrophic lateral sclerosis with posterior column involvement." Journal of Neuropathology and Experimental Neurology. 55(4). 481-490 (1996)
[Publications] 朝山,光太郎: "Immunolocalization of cellular glutathione peroxidase in adult rat lungs and quantitative analysis after post-embedding immunogold labeling." Histochemistry and Cell Biology. 105. 383-389 (1996)
[Publications] 柴田亮行: "Immunohistochemical study on superoxide dismutases in spinal cords from autopsied patients with amyotrophic lateral sclerosis." Developmental Neuroscience. 18. 492-498 (1996)
[Publications] 朝山光太郎: "活性酸素と病態,糖尿病" 臨床検査. 40(2). 176-180 (1996)
[Publications] 川田康介: "Immunohistochemical localization and quantitative analysis of superoxide dismutases in fetal and neonatal rat tissues : Fluorescence microscopyimage analysis." Acta Histochemica et Cytochemica. 29(4). 289-297 (1997)
[Publications] 西山和利: "Superoxide dismutase-like immunoreactivity is present in spheroids of Hallervorden Spatz disease." Acta Neuropathologica. (印刷中). (1997)

1996 Fiscal Year Annual Research Report

抗酸化酵素の細胞内局在および分泌機構の解明と成長発達、小児疾患に伴う変動

Principal Investigator

朝山 光太郎 山梨医科大学, 医学部, 講師 (70129310)

Research Products

[Publications] 朝山,光太郎: "Increased activity of plasma cholesteryl ester transfer protein in children with end-stage renal disease receiving continuous ambulatory peritonealdialysis." Nephron. 72. 231-236 (1996)

[Publications] 朝山,光太郎: "Immunohistochemical localization and quantitative analysis of cellular glutathione peroxidase in foetal and neonatal rat tissues : fluorescence microscopy image analysis." Histochemical Journal. 28. 63-71 (1996)

[Publications] 柴田,亮行: "Intense superoxide dismutase-1 immunoreactivity in intracytoplasmic hyaline inclusions of familial amyotrophic lateral sclerosis with posterior column involvement." Journal of Neuropathology and Experimental Neurology. 55(4). 481-490 (1996)

[Publications] 朝山,光太郎: "Immunolocalization of cellular glutathione peroxidase in adult rat lungs and quantitative analysis after post-embedding immunogold labeling." Histochemistry and Cell Biology. 105. 383-389 (1996)

[Publications] 柴田 亮行: "Immunohistochemical study on superoxide dismutases in spinal cords from autopsied patients with amyotrophic lateral sclerosis." Developmental Neuroscience. 18. 492-498 (1996)

[Publications] 朝山 光太郎: "活性酸素と病態,糖尿病" 臨床検査. 40(2). 176-180 (1996)

[Publications] 川田 康介: "Immunohistochemical localization and quantitative analysis of superoxide dismutases in fetal and neonatal rat tissues : Fluorescence microscopyimage analysis." Acta Histochemica et Cytochemica. 29(4). 289-297 (1997)

[Publications] 西山 和利: "Superoxide dismutase-like immunoreactivity is present in spheroids of Hallervorden Spatz disease." Acta Neuropathologica. (印刷中). (1997)

朝山光太郎山梨医科大学, 医学部, 講師 (70129310)

[Publications] 柴田亮行: "Immunohistochemical study on superoxide dismutases in spinal cords from autopsied patients with amyotrophic lateral sclerosis." Developmental Neuroscience. 18. 492-498 (1996)

[Publications] 朝山光太郎: "活性酸素と病態,糖尿病" 臨床検査. 40(2). 176-180 (1996)

[Publications] 川田康介: "Immunohistochemical localization and quantitative analysis of superoxide dismutases in fetal and neonatal rat tissues : Fluorescence microscopyimage analysis." Acta Histochemica et Cytochemica. 29(4). 289-297 (1997)

[Publications] 西山和利: "Superoxide dismutase-like immunoreactivity is present in spheroids of Hallervorden Spatz disease." Acta Neuropathologica. (印刷中). (1997)