1996 Fiscal Year Annual Research Report
| Project/Area Number |
08670985
|
|---|
| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
|
| Research Institution | Jikei University School of Medicine |
|---|
Principal Investigator |
澤田 俊一 東京慈恵会医科大学, 医学部, 講師 (50187291)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
米本 広明 東京慈恵会医科大学, 医学部, 助手 (30266704)
中田 良子 東京慈恵会医科大学, 医学部, 助手 (20256423)
|
|---|
| Keywords | NF1 / PCR / SSCP / second hit / somatic mutation |
|---|
| Research Abstract |
研究代表者はユタ大学のグループと共同で,すでにそれぞれのエクソンを特異的に増幅するプライマーを60全てのNF1エクソンについて作製し,種々のNF1遺伝子研究に使用している.このプライマーでpolymerase chain reaction(PCR)法を行い,さらに21M13,M13RP1ユニバーサルプライマーを利用して,size-shift assay,singl strand conformation polymorphism(SSCP)法,magnetic beadsを利用したdirect sequence法といった手技を用いて遺伝子変異の解析を行った.我々は,20名のNF1患者の末梢血中血球分画より抽出したconstitutional DNAを被験対象に,上記手法を用いてNF1遺伝子の60エクソン全てを解析し,報告した.この検索では4例のsmall insertion or deletion,4例のsplice mutation,2例のnonsence mutation,ならびに1例のamino acid substitutionの合計11例のNF1遺伝子変異を検出している.これにより本邦におけるNF1遺伝子変異のDNA診断が可能になったものと考える.
NF1遺伝子のsomatic mutationについて,我々は1例のNF1患者の神経線維腫より抽出したDNAを被験対象に上記方法を用いて変異の検索を行い,4bpのsmall deletionであるsomatic mutationを検出している(Shunichi Sawada,et al.,Nature Genetics:Vol.14,p110-112,1996).この結果により,すでにAPC遺伝子等で報告されている遺伝子におけるsecond hitがNF1遺伝子でも確認された.今後さらに多くの良性腫瘍(神経線維腫,神経膠腫,髄膜腫など),悪性腫瘍(悪性神経鞘腫など)を被検材料として,NF1におけるsomatic mutationを検索する計画があり,すでに米国ユタ大学の遺伝子研究所のグループ(Dr.David H.Viskochil,Dr.Smita M Purandareら)と共同で行う予定である.
|
-
[Publications] Shunichi Sawada: "Identification of NF1 mutation in both alleles of a dermal neurofibroma" Nature Genetics. Vol.14. 110-112 (1996)
-
[Publications] Smita M.Purandare: "Identification of Neurofibromatosis 1 (NF1) Homologous Loci by Direct Sequencing,Florescence in Situ Hybridization,and PCR Amplification of Somatic Cell Hybrids" Genomics. Vol.30. 476-485 (1995)
-
[Publications] Smita M.Purandare: "Genotyping of PCR-based polymorphisms and linkage-disequilibrium analysis" Am.J.Human Genetics. Vol.59. 159-166 (1996)
-
[Publications] David Viskochil: "Identification of NF1 mutations in both alleles of a dermal neurofibroma" The American Society of Human Genetics 46th Annual Meeting. (1996)
